目的:通過高糖高脂離體培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞,模擬心肌細胞的糖尿病環(huán)境,再給予西格列汀處理,觀察高糖高脂造模組與正常對照組及造模后藥物處理組細胞的自噬和凋亡表達情況。方法:實驗分為三部分:（1）大鼠H9c2心肌細胞在體外培養(yǎng),隨機分為正常對照組（Con組）、高糖高脂組（HP組）和高糖高脂+不同濃度西格列汀組（0.1、1、5、10、20和50μmol·L-1）（HP+Sit組）,采用CCK-8檢測細胞活力,選擇最佳的西格列汀作用濃度;（2）將體外培養(yǎng)的大鼠H9c2心肌細胞隨機分為正常對照組（Con組）、高糖高脂組（HP組）、西格列汀組（Sit組）和高糖高脂+西格列汀組（HP+Sit組）,運用蛋白免疫印跡法（Western Blot,WB）檢測自噬相關蛋白LC3和Beclin-1的表達情況,采用單丹磺酰戊二胺（Monodansylcadaverine,MDC）熒光染色法檢測細胞內(nèi)自噬體的形成,通過以上實驗觀察西格列汀對高糖高脂條件下H9c2細胞自噬的影響;（3）體外培養(yǎng)的大鼠H9c2心肌細胞隨機分為正常對照組（Con組）、高糖高脂組（HP組）、西格列汀組（Sit組）和高糖高脂+西格列汀組... 

【文章來源】：湖北科技學院湖北省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

高糖高脂單獨處理及高糖高脂聯(lián)合不同濃度西格列汀處理H9c2細胞(x±，n=3）

圖 2 高糖高脂單獨處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理 H9c2 細胞(x ± ，n =3）。 A. 分析高糖高脂單獨處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理心肌 H9c2 細胞 24h，對胞內(nèi) LC3 積累的影響，*與 Con 組相比，P <0.05，#與 HP 組相比，P <0.05；B. 分析高糖高脂處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理心肌 H9c2 細胞 24h，對胞內(nèi) Beclin-1積累的影響，*與 Con 組相比，P <0.05，#與 HP 組相比，P <0.05。2.2 西格列汀對高糖高脂環(huán)境下心肌細胞內(nèi)自噬體形成的影響MDC 標記的自噬空泡表現(xiàn)為分布在細胞質或核周空間中的不同點狀結構。MDC熒光染色結果顯示：與 Con 相比，HP 組 MDC 陽性細胞所占比例降低，給予 Sit 后有明顯增多，單獨給予 Sit 組表達與 Con 組無明顯差異。見圖 3。由 Western blot 和 MDC熒光染色檢測結果可見，HP 抑制 H9c2 細胞的自噬表達，Sit 則可以逆轉 HP 對 H9c2細胞的自噬抑制。

糖高脂單獨處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理 H9c2 細析高糖高脂單獨處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理心肌 H積累的影響，*與 Con 組相比，P <0.05，#與 HP 組相比，P理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理心肌 H9c2 細胞 24h，對*與 Con 組相比，P <0.05，#與 HP 組相比，P <0.05。汀對高糖高脂環(huán)境下心肌細胞內(nèi)自噬體形成的影記的自噬空泡表現(xiàn)為分布在細胞質或核周空間中的不同點顯示：與 Con 相比，HP 組 MDC 陽性細胞所占比例降低，獨給予 Sit 組表達與 Con 組無明顯差異。見圖 3。由 Weste結果可見，HP 抑制 H9c2 細胞的自噬表達，Sit 則可以逆制。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]糖尿病心肌病發(fā)病機制的研究進展[J]. 黃婭茜,王憲,孔煒.  生理科學進展. 2010(01)



本文編號：2901649