報告基因法檢測重組人sgp130-Fc融合蛋白生物學(xué)活性
發(fā)布時間：2020-12-06 19:59
重組人可溶性gp130-Fc融合蛋白（sgp130-Fc）是一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的選擇性IL-6反式信號傳導(dǎo)抑制劑和抗炎生物藥。目前其生物學(xué)活性測定方法是BAF3/gp130細胞增殖抑制法,此方法耗時較長、操作復(fù)雜,并且BAF3/gp130細胞對IL-6/sIL-6Rα復(fù)合物只是部分依賴性增殖（細胞培養(yǎng)密度過大會喪失這種依賴性）,細胞培養(yǎng)的不確定性導(dǎo)致了活性檢測的不穩(wěn)定性,容易引起實驗結(jié)果變異度大、重復(fù)性差。而基于藥物作用機制的報告基因法（reporter gene assay,RGA）由于其簡便性、特異性、高靈敏度和低變異度,在藥物生物學(xué)活性檢測領(lǐng)域得到越來越廣泛的應(yīng)用。本課題的目的是建立一種快速測定sgp130-Fc生物學(xué)活性的報告基因測活方法。根據(jù)sgp130-Fc的作用機制（特異性抑制IL-6反式信號通路）,選擇包含JAK/STAT3特異的DNA反應(yīng)元件SIE、螢光素酶基因和潮霉素篩選標記基因的質(zhì)粒載體,轉(zhuǎn)染CHO-K1細胞并篩選對sgp130-Fc反應(yīng)性好、可穩(wěn)定傳代的單克隆細胞株,建立報告基因測活方法并進行條件優(yōu)化和方法學(xué)驗證。本研究成功構(gòu)建了報告基因細胞株CHO/SI...
【文章來源】：中國食品藥品檢定研究院北京市
【文章頁數(shù)】：83 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
gp130和IL-6R的分子結(jié)構(gòu)
中國食品藥品檢定研究院 IL-6R 的分子結(jié)構(gòu)。 PM：細胞質(zhì)膜。Ig：IgG 樣結(jié)構(gòu)域。結(jié)合結(jié)構(gòu)域。FNIII：III 纖維黏連素樣結(jié)構(gòu)域。[12] Molecular structure of gp130 and IL-6R PM: Plasma membranBM: Cytokine-binding module. FN III: Fibronectin-type-III-like
圖 3. Sgp130-Fc 的分子結(jié)構(gòu)[13]。Figure 3. Sgp130-Fc molecular structure[13].融合蛋白屬于重組蛋白類藥物，由于其分子異質(zhì)性，為關(guān)鍵質(zhì)量屬性（Critical Quality Attribute，CQA）新藥開發(fā)和藥物質(zhì)量控制具有重要意義。目前該藥物AF3/gp130 細胞增殖抑制法，即通過藥物對 IL-6/sI BAF3/gp130 增殖的抑制作用，評價藥物的生物學(xué)活操作復(fù)雜，并且由于 BAF3/gp130 細胞對 IL-6/sIL-殖（細胞培養(yǎng)密度過大會喪失這種依賴性），只能維定期（4 至 6 周）通過平行培養(yǎng)不含 IL-6/sIL-6Rα復(fù)IL-6Rα復(fù)合物的生長依賴性，一旦喪失了這種依賴性
【參考文獻】：
期刊論文
[1]白細胞介素-6抑制藥治療類風濕關(guān)節(jié)炎的研究進展[J]. 陳玥. 醫(yī)藥導(dǎo)報. 2017(06)
[2]生物技術(shù)藥物生物學(xué)活性測定方法研究進展[J]. 于雷,饒春明. 生物技術(shù)通訊. 2017(03)
[3]IL-6靶向治療腫瘤的研究進展[J]. 禹博,董鈺,宋姜楠,牛秀瓏,王越. 武警后勤學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2017(03)
[4]癌癥中IL-6信號通路研究進展[J]. 唐甜,安東建,曹建國. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2016(09)
[5]報告基因法檢測促胰島素分泌肽融合蛋白生物學(xué)活性[J]. 于雷,范文紅,王蘭,周長明,王軍志,饒春明. 藥物分析雜志. 2016(03)
[6]炎癥細胞因子在腫瘤微環(huán)境中的作用及其作為治療靶點的研究進展[J]. 馬守寶,林丹丹,劉海燕. 生命科學(xué). 2016(02)
[7]2014年全球熱門藥物靶點分析——IL-6靶標藥物[J]. 劉麗麗,毛艷艷,高柳濱. 藥學(xué)進展. 2015(11)
[8]人源化白細胞介素-6受體抗體在類風濕關(guān)節(jié)炎治療中的應(yīng)用[J]. 鄭西希,張奉春. 中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志. 2014(04)
[9]利用微滴數(shù)字PCR分析轉(zhuǎn)基因生物外源基因拷貝數(shù)[J]. 姜羽,胡佳瑩,楊立桃. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(10)
[10]生物樣品中化學(xué)藥物定量分析方法驗證的進展與解讀[J]. 于敏,張雙慶,李佐剛. 藥物分析雜志. 2013(11)
碩士論文
[1]報告基因法測定重組人促紅素生物學(xué)活性研究[D]. 楊玉帥.中國食品藥品檢定研究院 2014
本文編號：2901947
【文章來源】：中國食品藥品檢定研究院北京市
【文章頁數(shù)】：83 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
gp130和IL-6R的分子結(jié)構(gòu)
中國食品藥品檢定研究院 IL-6R 的分子結(jié)構(gòu)。 PM：細胞質(zhì)膜。Ig：IgG 樣結(jié)構(gòu)域。結(jié)合結(jié)構(gòu)域。FNIII：III 纖維黏連素樣結(jié)構(gòu)域。[12] Molecular structure of gp130 and IL-6R PM: Plasma membranBM: Cytokine-binding module. FN III: Fibronectin-type-III-like
圖 3. Sgp130-Fc 的分子結(jié)構(gòu)[13]。Figure 3. Sgp130-Fc molecular structure[13].融合蛋白屬于重組蛋白類藥物，由于其分子異質(zhì)性，為關(guān)鍵質(zhì)量屬性（Critical Quality Attribute，CQA）新藥開發(fā)和藥物質(zhì)量控制具有重要意義。目前該藥物AF3/gp130 細胞增殖抑制法，即通過藥物對 IL-6/sI BAF3/gp130 增殖的抑制作用，評價藥物的生物學(xué)活操作復(fù)雜，并且由于 BAF3/gp130 細胞對 IL-6/sIL-殖（細胞培養(yǎng)密度過大會喪失這種依賴性），只能維定期（4 至 6 周）通過平行培養(yǎng)不含 IL-6/sIL-6Rα復(fù)IL-6Rα復(fù)合物的生長依賴性，一旦喪失了這種依賴性
【參考文獻】：
期刊論文
[1]白細胞介素-6抑制藥治療類風濕關(guān)節(jié)炎的研究進展[J]. 陳玥. 醫(yī)藥導(dǎo)報. 2017(06)
[2]生物技術(shù)藥物生物學(xué)活性測定方法研究進展[J]. 于雷,饒春明. 生物技術(shù)通訊. 2017(03)
[3]IL-6靶向治療腫瘤的研究進展[J]. 禹博,董鈺,宋姜楠,牛秀瓏,王越. 武警后勤學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2017(03)
[4]癌癥中IL-6信號通路研究進展[J]. 唐甜,安東建,曹建國. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2016(09)
[5]報告基因法檢測促胰島素分泌肽融合蛋白生物學(xué)活性[J]. 于雷,范文紅,王蘭,周長明,王軍志,饒春明. 藥物分析雜志. 2016(03)
[6]炎癥細胞因子在腫瘤微環(huán)境中的作用及其作為治療靶點的研究進展[J]. 馬守寶,林丹丹,劉海燕. 生命科學(xué). 2016(02)
[7]2014年全球熱門藥物靶點分析——IL-6靶標藥物[J]. 劉麗麗,毛艷艷,高柳濱. 藥學(xué)進展. 2015(11)
[8]人源化白細胞介素-6受體抗體在類風濕關(guān)節(jié)炎治療中的應(yīng)用[J]. 鄭西希,張奉春. 中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志. 2014(04)
[9]利用微滴數(shù)字PCR分析轉(zhuǎn)基因生物外源基因拷貝數(shù)[J]. 姜羽,胡佳瑩,楊立桃. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2014(10)
[10]生物樣品中化學(xué)藥物定量分析方法驗證的進展與解讀[J]. 于敏,張雙慶,李佐剛. 藥物分析雜志. 2013(11)
碩士論文
[1]報告基因法測定重組人促紅素生物學(xué)活性研究[D]. 楊玉帥.中國食品藥品檢定研究院 2014
本文編號：2901947
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