發(fā)布時間：2020-11-12 23:47

　　 目的:順鉑是一種細胞毒性抗腫瘤藥物,臨床上作為一線化療藥物用于治療多種實體腫瘤。但順鉑給藥后會引起各種劑量限制性毒性反應,其中最主要的是腎毒性。為了提高順鉑治療的靶向性和降低毒副作用,我們開發(fā)了一種順鉑長效靶向脂質(zhì)體(ES-SSL-DDP),已經(jīng)證明該脂質(zhì)體能有效靶向于雌激素受體陽性表達的子宮頸癌Hela細胞及其實體瘤,并具有顯著的抗腫瘤作用�，F(xiàn)階段,為了闡述該脂質(zhì)體ES-SSL-DDP在體內(nèi)的分布代謝過程和和毒性大小,本論文對該順鉑長效靶向脂質(zhì)體進行藥代動力學、組織分布和急性毒性研究。方法:(1)建立和驗證順鉑體內(nèi)分析方法。采用柱前衍生化高效液相色譜法,將順鉑與二乙基二硫代氨基甲酸鈉(DDTC)發(fā)生絡合反應,生成的Pt(DDTC)_2在254 nm具有很強的紫外吸收。該HPLC方法以甲醇/水(75:25)作為流動相,流速1 mL/min。(2)通過小鼠尾靜脈注射6.0 mg/kg劑量的游離順鉑(DDP)、普通順鉑脂質(zhì)體(L-DDP)和順鉑長效靶向脂質(zhì)體(ES-SSL-DDP)后不同時間點采集血漿和組織樣品,經(jīng)處理后用HPLC測定血漿和組織中順鉑含量,應用DAS 2.0軟件計算藥代動力學參數(shù),考察藥代動力學和組織分布。(3)小鼠尾靜脈注射不同劑量的DDP、L-DDP和ES-SSL-DDP后觀察和記錄14天內(nèi)動物狀態(tài)和死亡數(shù),計算LD_(50),對第14天存活小鼠進行全血分析和計算臟器系數(shù)以及測定血尿素氮和肌酐含量,綜合評價ES-SSL-DDP的急性毒性。結(jié)果:(1)順鉑保留時間約為8.22 min,無雜質(zhì)干擾,分離度好(R1.5)。血漿樣品和組織樣品標準曲線線性關(guān)系良好,線性范圍均為0.1~10.0μg/mL。最低檢測限和定量限分別為0.05μg/mL和0.1μg/mL。血漿樣品日內(nèi)、日間精密度均小于10%,回收率在100~110%之間;組織樣品精密度均小于10%,回收率在90~110%之間。樣品處理后穩(wěn)定性結(jié)果提示樣品處理完后需在12 h內(nèi)完成測定。(2)ES-SSL-DDP與游離DDP相比,C_(max)和t_(1/2)分別提高了2.4倍和26.7倍,AUC提高了25倍。ES-SSL-DDP組織分布不同于游離DDP,ES-SSL-DDP在心、脾組織分布較高,在腎組織中分布較DDP組要少。(3)小鼠尾靜脈注射DDP、L-DDP、ES-SSL-DDP的LD_(50)分別為13.1、16.1和18.0 mg/kg。尾靜脈注射ES-SSL-DDP的小鼠相比游離DDP和L-DDP,相同劑量下存活狀態(tài)要更好,體重恢復更快。ES-SSL-DDP組小鼠血液學和臟器系數(shù)未出現(xiàn)明顯的改變。游離DDP組BUN和Cre水平明顯升高,而ES-SSL-DDP組及L-DDP組的BUN和Cre水平與正常生理鹽水組相當。結(jié)論:本論文采用高效液相色譜法成功建立順鉑體內(nèi)分析方法,該HPLC方法符合方法學要求,可用于血漿和組織樣品中順鉑含量測定。小鼠尾靜脈注射順鉑長效靶向脂質(zhì)體(ES-SSL-DDP)后具有更高的血藥濃度和更長的半衰期,說明ES-SSL-DDP能夠減慢順鉑的代謝消除速率,延長順鉑在體內(nèi)的循環(huán)時間。ES-SSL-DDP能夠改變順鉑組織分布,減少順鉑在腎臟累積。ES-SSL-DDP具有更小的急性毒性,降低了順鉑對血液系統(tǒng)的毒性和腎毒性。
【學位單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

第二章 順鉑體內(nèi)分析方法的建立2.3 實驗結(jié)果與討論2.3.1 專屬性取空白血漿、加入順鉑標準溶液的血漿、及小鼠給藥后的血漿樣品按照“2.2.2”項下進行處理，按照“2.2.3”色譜條件進樣測定，各樣品色譜圖結(jié)果見圖 2.1（A-C）。順鉑保留時間為 8.224 min，血漿中其他內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾順鉑含量測定，分離度好（R > 1.5）。

B空白血漿+順鉑+DDTCHPLC色譜圖

圖 2.1C 給藥后血漿+DDTC HPLC 色譜圖2.3.2 標準曲線2.3.2.1 順鉑血漿標準曲線取 180 μL 小鼠空白血漿加入 20 uL 順鉑系列標準溶液，制備成含順鉑 0.1、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL 的血漿標準樣品。按照“2.2.2”項下對樣品進行處理。測定結(jié)果見表 2.1。以濃度（μg/mL）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸繪制標準曲線（見圖 2.2），回歸方程為 Y = 58620X - 2375，r2= 0.9998。結(jié)果說明順鉑血漿樣品在 0.1~10.0 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。表 2.1 順鉑血漿標準曲線峰面積測定結(jié)果（n = 3）
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李維鳳;牛曉峰;范特;王小鵬;劉燕玲;陳天寧;;高效液相色譜法測定皮下植入順鉑的血漿及腎臟濃度[J];南方醫(yī)科大學學報;2010年02期

相關(guān)碩士學位論文 前1條

1 王曾;長效靶向順鉑脂質(zhì)體的制備及其抗腫瘤作用研究[D];吉林大學;2016年

本文編號：2881406