發(fā)布時(shí)間：2020-11-10 13:14

　　 目的:探討淫羊藿總黃酮(EF)與吡柔比星(THP)聯(lián)用體外抗人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的作用機(jī)制。方法:設(shè)立空白對照組和EF組(EF濃度:50、100、200、400、800μg·m L-1)、THP組(THP濃度:1、2、4、8、16μg·m L-1)及兩藥聯(lián)合組(EF+THP濃度:50+1、100+2、200+4、400+8、800+16μg·m L-1)三個實(shí)驗(yàn)組,利用倒置相差顯微鏡觀察不同時(shí)間段各組細(xì)胞形態(tài);作用48小時(shí)后,采用CCK-8法檢測各組不同濃度的細(xì)胞抑制率,根據(jù)中效原理計(jì)算兩藥聯(lián)用的聯(lián)合指數(shù)(CI),分析其相互作用;采用Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡情況;RT-PCR及Western-blotting檢測Caspase-3、P21、Bcl-2 m RNA及其蛋白的表達(dá)。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞呈不同程度凋亡狀態(tài),細(xì)胞增殖抑制率隨藥物濃度增加呈遞增趨勢,聯(lián)合組細(xì)胞增殖抑制率及凋亡率均明顯高于兩單藥組(P0.05),聯(lián)合組抑制率在10~90%時(shí)CI值處于0.374~0.770之間;EF和THP均能使Caspase-3、P21 m RNA及蛋白的表達(dá)明顯下降,使Bcl-2 m RNA及蛋白的表達(dá)上升(P0.05),聯(lián)合組趨勢更明顯(P0.05)。結(jié)論:EF和THP明顯抑制骨肉瘤MG-63細(xì)胞活性,并且通過上調(diào)二者Caspase-3、P21 m RNA及其蛋白、下調(diào)Bcl-2 m RNA及其蛋白的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,兩藥聯(lián)合后,細(xì)胞抑制率在10~90%時(shí)均表現(xiàn)為:EF與THP在體外抗骨肉瘤MG-63細(xì)胞具有相互協(xié)同作用。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

第 3 章 結(jié)果第 3 章 結(jié)果3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察骨肉瘤 MG-63 細(xì)胞加藥 24 小時(shí)后細(xì)胞增殖開始受抑制：EF 組細(xì)胞逐漸變得不規(guī)則繼而變小變圓，細(xì)胞間連接開始消失，細(xì)胞周圍折光度開始增高，細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡改變；THP 組細(xì)胞在增殖受抑制的同時(shí)反而逐漸增大并伸出偽足，最后逐漸變小變圓，細(xì)胞質(zhì)密度開始增高，胞膜逐漸將細(xì)胞殘骸包裹形成凋亡小體；聯(lián)合組細(xì)胞增殖受抑制程度更明顯，細(xì)胞變化呈現(xiàn) EF 和 THP 藥物所致兩種形態(tài)。藥物對細(xì)胞的抑制及凋亡作用呈現(xiàn)明顯的時(shí)間和濃度依賴性：隨著時(shí)間的延長和藥物濃度的增加，細(xì)胞抑制及凋亡現(xiàn)象越明顯。見圖 3.1。

圖 3.2 EF 和 THP 作用 MG-63 細(xì)胞 48h 后細(xì)胞凋亡率（x±s，n=3）注：與對照組相比，*P<0.05；與聯(lián)合組相比，#P<0.05。3.5 Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA 的表達(dá)EF 和 THP 分別單獨(dú)作用 MG-63 細(xì)胞 48 小時(shí)后，相對于對照組，EF 組、THP 組、聯(lián)合組的 Caspase-3、P21 mRNA 表達(dá)均明顯上調(diào)，Bcl-2 mRNA 表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05）；而 EF 組與 THP 組相比，Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA的表達(dá)無明顯區(qū)別（P>0.05）；相對于 EF 組或者 THP 組，聯(lián)合組的 Caspase-3P21 mRNA 的上調(diào)趨勢及 Bcl-2 mRNA 的下調(diào)趨勢更明顯（P<0.05）。如圖 3.所示。

圖 3.2 EF 和 THP 作用 MG-63 細(xì)胞 48h 后細(xì)胞凋亡率（x±s，n=3）注：與對照組相比，*P<0.05；與聯(lián)合組相比，#P<0.05。3.5 Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA 的表達(dá)EF 和 THP 分別單獨(dú)作用 MG-63 細(xì)胞 48 小時(shí)后，相對于對照組，EF 組、THP 組、聯(lián)合組的 Caspase-3、P21 mRNA 表達(dá)均明顯上調(diào)，Bcl-2 mRNA 表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05）；而 EF 組與 THP 組相比，Caspase-3、P21 及 Bcl-2 mRNA的表達(dá)無明顯區(qū)別（P>0.05）；相對于 EF 組或者 THP 組，聯(lián)合組的 Caspase-3、P21 mRNA 的上調(diào)趨勢及 Bcl-2 mRNA 的下調(diào)趨勢更明顯（P<0.05）。如圖 3.3所示。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2877969