適配體特異性修飾DNA納米治療系統(tǒng)抗腫瘤作用研究
發(fā)布時間：2020-12-05 16:09
研究目的:用從噬菌體M13mp18中提取出來的長鏈單鏈DNA和相應(yīng)的短鏈DNA制備出含有多個可修飾位點的DNA納米管,通過修飾適配體C2NP,使得構(gòu)建的DNA納米管可以靶向淋巴瘤細胞,提高所載化學藥阿霉素的抗腫瘤作用,降低毒副作用。通過調(diào)整C2NP的數(shù)量和間距,使其更好地發(fā)揮生物治療作用,載藥后可同時發(fā)揮C2NP的生物治療作用和阿霉素的化學治療作用,提高抗腫瘤效果。研究方法:用PCR儀將從噬菌體中提取出的兩種M13mp18單鏈DNA與相應(yīng)的短鏈DNA制備成螺旋的DNA納米管和直形的DNA納米管,通過延長鏈的方式將核酸適配體C2NP修飾到DNA納米管結(jié)構(gòu)上,制備出由不同數(shù)量和間距的C2NP修飾的可靶向淋巴瘤的DNA納米管。通過瓊脂糖凝膠電泳、透射電子顯微鏡和原子力顯微鏡等對DNA納米管結(jié)構(gòu)進行表征;DNA納米管的載藥量和體外釋放用酶標儀測阿霉素的熒光強度來考察;瓊脂糖凝膠電泳表征DNA納米管在含10%胎牛血清培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性;載體材料和緩沖鹽對人間變性大細胞淋巴瘤細胞K299的毒性、DNA納米管載藥系統(tǒng)對K299細胞的生物作用以及生物作用和化療聯(lián)合作用等采用CCK8法進行考察;用流式細胞...
【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：95 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
阿霉素的結(jié)構(gòu)式Fig.1MolecularstructureofDoxorubicin
治療性寡核苷酸已顯示出治療許多重大疾病的巨大潛力何將治療性寡核苷酸有效遞送至體內(nèi)靶部位仍然是需要解決的主要問個新興領(lǐng)域，DNA 納米技術(shù)應(yīng)用于許多方面，包括生物傳感和藥物靶向治療[42, 43]、腫瘤診斷[44]、納米芯片[45, 46]、生物分子自組裝[47-49]紙術(shù)（DNA Origami）概念最早是由 Nadrian Seeman[36]在 20 世紀 8。自此，DNA 納米技術(shù)成為了該研究領(lǐng)域的一大熱點，并在接下來內(nèi)得到迅猛發(fā)展。迄今為止，科學家們已經(jīng)設(shè)計和制造了具有不同結(jié)構(gòu)的多種 DNA 納米結(jié)構(gòu)和納米器件[50]。2006 年，Rothemund[37]等13mp18 噬菌體的單鏈 DNA 作為 scaffold 鏈，用一組設(shè)計好的短鏈鏈，通過堿基互補配對自組裝成預(yù)先設(shè)計好的 2D 結(jié)構(gòu)，這一研究實 的一維結(jié)構(gòu)研究向二維結(jié)構(gòu)研究的轉(zhuǎn)變，為 3D DNA 折紙[51-53]的構(gòu)礎(chǔ)。Zhao YX 等[54]設(shè)計并制備了 DNA 納米管結(jié)構(gòu)（圖 2 h），將化學入其中，使得阿霉素的釋放變得緩慢。Church 等[55]設(shè)計了 DNA 六邊并裝載抗體，通過適配體調(diào)控使抗體藥物在體內(nèi)特定部位釋放。這明 DNA 可作為藥物遞送載體將藥物智能化地遞送至靶部位。
前言過研究不同數(shù)量和間距的 C2NP 修飾的 DNA 納米管的體外抗腫瘤探討適配體的數(shù)量和間距對其發(fā)揮生物作用的影響。由于 CD30 的的線性距離為 5.7 nm，本課題設(shè)計了修飾有 15 個 C2NP，間距為NT-15Apt-3）和 6 nm（T-DNT-15Apt-6）的 DNA 納米管載體和 30 個 C 3 nm（T-DNT-30Apt-3）和 6 nm（T-DNT-30Apt-6）的 DNA 納米管4 所示。由于 C2NP 是通過誘導 CD30 三聚體化而引起細胞凋亡，所 C2NP 的分布具有合適的距離時才會更好地發(fā)揮作用，本研究對所行體外考察來驗證推測是否合理。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]2017年中國最新癌癥數(shù)據(jù)[J]. 本刊編輯部. 中國腫瘤臨床與康復. 2017(05)
[2]抗腫瘤藥物納米給藥系統(tǒng)研究進展[J]. 羅小林,易丹丹. 醫(yī)藥導報. 2015(02)
[3]淋巴瘤實驗動物模型構(gòu)建的研究與應(yīng)用[J]. 熊豫麟,張遠旭,黃云超,楊世華. 廣東醫(yī)學. 2014(09)
[4]腫瘤靶向納米制劑研究進展[J]. 魏麗莎,季艷霞,康振橋,鄭愛萍. 國際藥學研究雜志. 2014(01)
[5]淋巴瘤動物模型研究進展[J]. 劉芳,趙彤. 中國實驗血液學雜志. 2009(05)
博士論文
[1]胰腺癌易感基因LINC00673的發(fā)現(xiàn)及其功能研究[D]. 鄭健.北京協(xié)和醫(yī)學院 2015
碩士論文
[1]miR-126-3p調(diào)控豬卵巢顆粒細胞功能的研究[D]. 鄧熙.華南農(nóng)業(yè)大學 2016
本文編號：2899724
【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：95 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
阿霉素的結(jié)構(gòu)式Fig.1MolecularstructureofDoxorubicin
治療性寡核苷酸已顯示出治療許多重大疾病的巨大潛力何將治療性寡核苷酸有效遞送至體內(nèi)靶部位仍然是需要解決的主要問個新興領(lǐng)域，DNA 納米技術(shù)應(yīng)用于許多方面，包括生物傳感和藥物靶向治療[42, 43]、腫瘤診斷[44]、納米芯片[45, 46]、生物分子自組裝[47-49]紙術(shù)（DNA Origami）概念最早是由 Nadrian Seeman[36]在 20 世紀 8。自此，DNA 納米技術(shù)成為了該研究領(lǐng)域的一大熱點，并在接下來內(nèi)得到迅猛發(fā)展。迄今為止，科學家們已經(jīng)設(shè)計和制造了具有不同結(jié)構(gòu)的多種 DNA 納米結(jié)構(gòu)和納米器件[50]。2006 年，Rothemund[37]等13mp18 噬菌體的單鏈 DNA 作為 scaffold 鏈，用一組設(shè)計好的短鏈鏈，通過堿基互補配對自組裝成預(yù)先設(shè)計好的 2D 結(jié)構(gòu)，這一研究實 的一維結(jié)構(gòu)研究向二維結(jié)構(gòu)研究的轉(zhuǎn)變，為 3D DNA 折紙[51-53]的構(gòu)礎(chǔ)。Zhao YX 等[54]設(shè)計并制備了 DNA 納米管結(jié)構(gòu)（圖 2 h），將化學入其中，使得阿霉素的釋放變得緩慢。Church 等[55]設(shè)計了 DNA 六邊并裝載抗體，通過適配體調(diào)控使抗體藥物在體內(nèi)特定部位釋放。這明 DNA 可作為藥物遞送載體將藥物智能化地遞送至靶部位。
前言過研究不同數(shù)量和間距的 C2NP 修飾的 DNA 納米管的體外抗腫瘤探討適配體的數(shù)量和間距對其發(fā)揮生物作用的影響。由于 CD30 的的線性距離為 5.7 nm，本課題設(shè)計了修飾有 15 個 C2NP，間距為NT-15Apt-3）和 6 nm（T-DNT-15Apt-6）的 DNA 納米管載體和 30 個 C 3 nm（T-DNT-30Apt-3）和 6 nm（T-DNT-30Apt-6）的 DNA 納米管4 所示。由于 C2NP 是通過誘導 CD30 三聚體化而引起細胞凋亡，所 C2NP 的分布具有合適的距離時才會更好地發(fā)揮作用，本研究對所行體外考察來驗證推測是否合理。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]2017年中國最新癌癥數(shù)據(jù)[J]. 本刊編輯部. 中國腫瘤臨床與康復. 2017(05)
[2]抗腫瘤藥物納米給藥系統(tǒng)研究進展[J]. 羅小林,易丹丹. 醫(yī)藥導報. 2015(02)
[3]淋巴瘤實驗動物模型構(gòu)建的研究與應(yīng)用[J]. 熊豫麟,張遠旭,黃云超,楊世華. 廣東醫(yī)學. 2014(09)
[4]腫瘤靶向納米制劑研究進展[J]. 魏麗莎,季艷霞,康振橋,鄭愛萍. 國際藥學研究雜志. 2014(01)
[5]淋巴瘤動物模型研究進展[J]. 劉芳,趙彤. 中國實驗血液學雜志. 2009(05)
博士論文
[1]胰腺癌易感基因LINC00673的發(fā)現(xiàn)及其功能研究[D]. 鄭健.北京協(xié)和醫(yī)學院 2015
碩士論文
[1]miR-126-3p調(diào)控豬卵巢顆粒細胞功能的研究[D]. 鄧熙.華南農(nóng)業(yè)大學 2016
本文編號：2899724
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