發(fā)布時間：2020-11-22 00:27

　　 第一部分積雪草苷納米乳的處方前研究目的:建立高效液相(HPLC)測定積雪草苷(Asiaticoside,ASI)含量的方法;篩選對積雪草苷溶解度高的油、表面活性劑和助表面活性劑;建立積雪草苷納米乳(Asiaticoside nanoemulsions,ASI-NEs)包封率及溶解度的測定方法。方法:1.建立HPLC法測定ASI的含量,并進行精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等方法學考察。2.采用搖瓶-HPLC法測定ASI的各油水中分配比,并測定其在油、表面活性劑和助表面活性劑中的平衡溶解度。3.采用透析法測定了ASI-NEs的包封率(Entrapment efficiency,EE)。4.采用高速離心法測定ASI-NEs的溶解度。結(jié)果:1.建立了HPLC測定ASI含量的方法,方法學考察符合實驗要求,可用于包封率的計算。2.初步篩選出對積雪草苷溶解性較高的油、表面活性劑和助表面活性劑,分別為:單亞油酸甘油酯、蓖麻油、OA;RH-40、Labrasol;Transcutol CG、Transcutol P、PEG-400。3.采用透析法可有效分離游離ASI和ASI-NEs,確定透析平衡時間為3 h,考察了ASI-NEs的包封率。4.采用高速離心法可準確測定ASI-NEs的溶解度。小結(jié):采用HPLC測定ASI含量、透析法考察ASI-NEs包封率以及高速離心法測定ASI-NEs溶解度的方法均符合實驗要求,為后期處方篩選和工藝研究奠定了基礎(chǔ)。第二部分積雪草苷納米乳及其凝膠的制備和納米乳理化性質(zhì)考察目的:確定ASI-NEs的最優(yōu)制備工藝與處方,確定積雪草苷納米乳凝膠(Asiaticoside nanoemulsions-based gels,ASI-NBGs)的制備方法,考察ASI-NEs的理化性質(zhì)。方法:1.采用相容性實驗,初步篩選油、表面活性劑和助表面活性劑。并通過繪制偽三元相圖,以成乳區(qū)域面積大小為標準,對各相作進一步篩選,以確定各相種類。2.采用單因素實驗,以包封率為評價指標,確定ASI-NEs的最佳制備工藝。3.通過單純性網(wǎng)格設(shè)計(Simplex lattice design,SLD)優(yōu)化處方,以溶解度和包封率為評價指標,分別做多元模型擬合,得出擬合方程,并根據(jù)擬合方程繪制等高線圖和效應(yīng)面圖,得到理論ASI-NEs的最優(yōu)處方,對其進行驗證,確定最優(yōu)處方。4.對ASI-NEs的最優(yōu)處方進行理化性質(zhì)考察。選擇卡波姆940(P940)作凝膠基質(zhì),將P940置于ASI-NEs中溶脹24 h,三乙醇胺調(diào)節(jié)pH(7.0),制得ASI-NBGs。結(jié)果:1.通過相容性實驗和偽三元相圖的繪制確定了ASI-NEs處方的油、表面活性劑和助表面活性劑成分,分別為單亞油酸甘油酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油40(Cremophor RH 40,RH 40)、二乙二醇單乙醚。2.通過對ASI-NEs制備工藝的單因素考察,確定最佳制備工藝為:轉(zhuǎn)速700 rpm·min~(-1),溫度37°C,平衡時間50 min。3.采用SLD法優(yōu)化處方,得到最佳處方:單亞油酸甘油酯、RH40、二乙二醇單乙醚、水分別為5%、15%、26.3%、53.7%。溶解度和包封率實測值與預(yù)測值偏差分別為4.55%、3.69%。最優(yōu)處方的溶解度為13.97 mg·g~(-1),包封率為90.29%。4.ASI-NEs是O/W型納米乳,外觀澄清透明,pH值為6.8,平均粒徑為132±5.84 nm,多分散指數(shù)(PDI)為0.2211,具有較好的穩(wěn)定性,高速離心不分層。制得ASI-NBGs,其外觀透明,無結(jié)塊。小結(jié):成功制備了ASI-NEs和ASI-NBGs,該制劑均具有良好的外觀及理化性質(zhì)。第三部分積雪草苷納米乳及其凝膠的體外透皮特性研究目的:考察ASI-NEs和ASI-NBGs的體外透皮特性。方法:制備ASI-NEs和ASI-NBGs,采用改良的Franz擴散池,對ASI-NEs、ASI-NBGs進行透皮特性考察。并與市售軟膏、普通凝膠、添加促透劑凝膠進行透皮比較,繪制累積釋放曲線,計算12 h皮下滯留量,采用滯留時間法評價各積雪草苷透皮制劑的體外透皮特性。結(jié)果:ASI-NEs、ASI-NBGs與添加促透劑凝膠相比,前兩者透皮速率更快,明顯強于促透劑組,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);經(jīng)皮給藥12 h后,ASI-NEs和ASI-NBGs單位面積累積滲透量分別是3504.30±180.93μg·cm~(-2)和1187.40±128.88μg·cm~(-2),是市售軟膏對照組的6.57和2.23倍,皮膚滯留量分別是159.48±7.47μg·cm~(-2)和120.53±5.71μg·cm~(-2),是市售軟膏對照組的5.93和4.48倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。小結(jié):制備的ASI-NEs和ASI-NBGs具有良好的體外透皮特性。第四部分積雪草苷納米乳及其凝膠的皮膚藥動學研究目的:考察ASI-NEs和ASI-NBGs的皮膚藥動學特性。方法:本研究采用在體給藥分時取樣法,以小鼠為研究對象,比較ASI-NEs、ASI-NBGs和市售軟膏的皮膚藥動學行為。結(jié)果:使用ASI-NEs、ASI-NBGs后藥物達峰時間均為6 h,使用市售軟膏的達峰時間為8 h;ASI-NEs、ASI-NBGs、市售軟膏的藥時曲線下面積(AUC _(0-∞))分別為6227.85、4994.90、2321.36μg·h·g~(-1),即ASI-NEs和ASI-NBGs組分別是市售軟膏組的2.68倍和2.15倍。研究表明納米乳及納米乳凝膠作為積雪草苷透皮給藥載體,藥物在皮膚中能較快達到峰值,在較長時間內(nèi)保持穩(wěn)定釋放,使皮下藥物滯留增多且保持在一個相對恒定的水平,且具有較高的生物利用度。小結(jié):ASI-NEs和ASI-NBGs具有較高的生物利用度,適合開發(fā)成局部外用制劑。第五部分積雪草苷納米乳及其凝膠的皮膚刺激性和透皮機制研究目的:考察ASI-NEs、ASI-NBGs的皮膚刺激性和透皮機制。方法:1.采用新西蘭白兔為動物模型,通過考察ASI-NEs、ASI-NBGs單次和多次給藥對其正常和破損皮膚的影響,研究ASI-NEs、ASI-NBGs的皮膚刺激性。2.通過HE染色法考察家兔局部給藥對皮膚微觀結(jié)構(gòu)的影響,激光掃描共聚焦顯微鏡(CLSM)可視化研究藥物的分布及滲透行為,進而研究ASI-NEs、ASI-NBGs的透皮機制。結(jié)果:1.ASI-NEs、ASI-NBGs皮膚刺激性試驗表明:單次給藥后,ASI-NEs、ASI-NBGs對正常皮膚和破損皮膚均無刺激性;多次給藥后,ASI-NBGs對正常皮膚無刺激性,ASI-NEs對正常皮膚有輕度刺激性,ASI-NEs、ASI-NBGs對破損皮膚均有輕度刺激性,個別表現(xiàn)出具有勉強可見的紅斑,且一天后可完全自行消退。2.HE染色和CLSM研究表明ASI-NEs和ASI-NBGs的透皮機制主要是通過作用于皮膚角質(zhì)層微觀結(jié)構(gòu)并借助皮膚附屬器途徑,使藥物透過皮膚發(fā)揮治療作用。小結(jié):ASI-NEs和ASI-NBGs的透皮機制主要是通過作用于皮膚角質(zhì)層微觀結(jié)構(gòu)并借助皮膚附屬器途徑,使藥物透過皮膚發(fā)揮治療作用。ASI-NBGs是一種安全的皮膚局部用制劑,但應(yīng)避免用于破損皮膚。結(jié)論:本研究成功制備了ASI-NEs和ASI-NBGs,制備工藝簡單,重現(xiàn)性好。ASI-NEs和ASI-NBGs具有良好的透皮特性和較高的生物利用度。ASI-NBGs是一種安全的皮膚局部用制劑,但應(yīng)避免用于破損皮膚。
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R94
【部分圖文】：

side）是從傘形科植物積萜類化合物[1,2]，研究表、抗腫瘤、抗纖維化、神等作用[2,3]。目前臨床上主瘩和硬皮病等，且大量的痕療效確切[4]。于成纖維細胞、膠原蛋白F）和細胞信號傳導（Sm胞）等多方面的作用機制降低 TGF-β1mRNA 表達達明顯減少，達到促進Ⅰ型 Smad 通路，抑制瘢痕的磷酸化 Smad2 的含量，增。

圖 1 積雪草苷在不同油相中的平衡溶解度Fig. 1 Solubility of asiaticoside in different oils草苷在表面活性劑、助表面活性劑中的平衡溶ility of asiaticoside in different surfactants and co s

202 積雪草苷在表面活性劑、助表面活性劑中的平衡溶解度olubility of asiaticoside in different surfactants and co surfa圖 3 積雪草苷紫外掃描圖Fig. 3 The UV spectrum of asiaticoside
【參考文獻】

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本文編號：2893831