發(fā)布時間：2018-07-12 21:09

  本文選題：多藥耐藥 + ABCB1抑制劑��； 參考：《鄭州大學》2017年碩士論文

【摘要】：多藥耐藥性的產(chǎn)生,是導致腫瘤化療失敗的主要因素。研究報道ABC轉(zhuǎn)運體在腫瘤耐藥中發(fā)揮著重要作用,ABC轉(zhuǎn)運體家族成員之一的ABCB1,是最早發(fā)現(xiàn)的ABC轉(zhuǎn)運體,ABCB1的過表達是導致腫瘤耐藥性產(chǎn)生的關(guān)鍵因素之一。尋找高效低毒的ABCB1選擇性抑制劑已成為科研工作者的研究熱點。本課題利用ABCB1過表達的腫瘤耐藥細胞株,對一系列甾體衍生物進行了逆轉(zhuǎn)耐藥活性研究,旨在篩選出高效低毒的ABCB1選擇性抑制劑,并研究其逆轉(zhuǎn)耐藥的作用機制,為解決腫瘤耐藥性問題提供研究模型。具體研究內(nèi)容如下:1.以ABCB1過表達的結(jié)腸癌耐阿霉素SW620/Ad300細胞株為基礎,建立逆轉(zhuǎn)劑篩選平臺,采用MTT法對一系列甾體衍生物進行篩選,旨在尋找高效低毒的耐藥逆轉(zhuǎn)劑。結(jié)果表明,新型甾體化合物ASC26在濃度為5μM時能顯著逆轉(zhuǎn)ABCB1調(diào)控的耐藥,并且對細胞的抑制率僅為7.39%。2.利用MTT法評價ASC26對七對腫瘤耐藥及其親本細胞的增殖抑制作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)ASC26在8μM時,對這七對腫瘤耐藥及親本細胞的抑制率均小于15%,即沒有細胞毒性。3.進一步研究ASC26在濃度為8μM時的體外逆轉(zhuǎn)耐藥活性。結(jié)果表明,ASC26能使高表達ABCB1的腫瘤耐藥細胞對紫杉醇(ABCB1的底物)的敏感性顯著增加,而對順鉑(非ABCB1的底物)的抗腫瘤活性則無明顯影響。此外,對于ABCG2過表達的耐藥細胞,ASC26未表現(xiàn)出逆轉(zhuǎn)耐藥的作用。4.利用高效液相法檢測ASC26對ABCB1高表達的腫瘤耐藥細胞及其親本細胞內(nèi)紫杉醇蓄積和外排的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),ASC26能顯著增加紫杉醇在ABCB1高表達的腫瘤耐藥細胞中的蓄積,抑制ABCB1高表達的腫瘤耐藥細胞對紫杉醇的外排,提高細胞內(nèi)紫杉醇含量,而對親本腫瘤細胞內(nèi)紫杉醇的蓄積和外排無明顯作用。5.流式細胞術(shù)檢測ASC26對ABCB1高表達的SW620/Ad300細胞內(nèi)羅丹明(Rho123)蓄積的影響。結(jié)果表明,ASC26能顯著增加SW620/Ad300細胞內(nèi)Rho123的滯留率,但對親本SW620細胞內(nèi)Rho123的蓄積無明顯影響。6.免疫熒光檢測ASC26對SW620/Ad300細胞內(nèi)ABCB1轉(zhuǎn)運蛋白表達位點的影響。ASC26作用于SW620/Ad300細胞72 h后,免疫熒光法檢測ASC26對ABCB1表達位點的作用。結(jié)果表明,ASC26不改變細胞內(nèi)ABCB1的蛋白表達位點。8.利用Western blot檢測ASC26對ABCB1蛋白表達水平的影響。由Western blot結(jié)果可知,ASC26分別作用于SW620/Ad300耐藥細胞0 h,24 h,48 h,72h后,并不改變細胞內(nèi)ABCB1的蛋白表達水平。9.分子對接實驗研究ASC26與人同源ABCB1分子模型的相互作用關(guān)系。分子對接實驗表明,化合物ASC26能結(jié)合在ABCB1轉(zhuǎn)運蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域的藥物結(jié)合口袋上,從而抑制ABCB1對化療藥物的外排轉(zhuǎn)運。本課題發(fā)現(xiàn)了一個選擇性ABCB1抑制劑,新型甾體化合物ASC26,在無毒濃度下,能顯著逆轉(zhuǎn)ABCB1介導的腫瘤耐藥。進一步的機制研究表明,ASC26的逆轉(zhuǎn)耐藥機制是通過抑制ABCB1轉(zhuǎn)運泵的外排轉(zhuǎn)運功能,而不是通過影響ABCB1的蛋白表達來發(fā)揮逆轉(zhuǎn)耐藥作用。ASC26能與ABCB1轉(zhuǎn)運蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域的藥物結(jié)合口袋結(jié)合,抑制ABCB1對抗腫瘤藥物的外排作用,增加細胞內(nèi)抗腫瘤藥物的濃度,從而提高腫瘤細胞對化療藥物的敏感性,達到逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的效果。這一研究成果將為解決腫瘤耐藥性問題提供新的研究方案和研究模型。
[Abstract]:The production of multidrug resistance is the main factor leading to the failure of tumor chemotherapy. The study reports that the ABC transporter plays an important role in the drug resistance of the tumor. ABCB1, one of the members of the ABC transporter family, is the earliest found ABC transporter. The overexpression of ABCB1 is one of the key factors leading to the production of tumor resistance. The search for high efficiency and low toxicity ABCB1 Selective inhibitors have become the research hotspots of researchers. This topic uses ABCB1 overexpressed tumor resistant cell lines to reverse the drug resistance of a series of steroid derivatives. The purpose of this study is to screen out highly toxic and low toxic ABCB1 selective inhibitors, and to study the mechanism of its reversal of drug resistance, in order to solve the problem of drug resistance. The specific research contents are as follows: 1. based on the ABCB1 overexpressed adriamycin resistant SW620/Ad300 cell line of colon cancer, the reverse agent screening platform was established and a series of steroid derivatives were screened by the MTT method. The results showed that the new steroid compound ASC26 was at the concentration of 5 u M. The resistance to ABCB1 regulation was significantly reversed and the inhibitory rate to the cells was only 7.39%.2. using MTT to evaluate the inhibitory effect of ASC26 on the proliferation of tumor resistance and their parent cells by ASC26. The results showed that the inhibition rate of the seven against tumor resistance and parental cells was less than 15% when ASC26 was at 8 micron, that is, no cytotoxic.3. was further studied for ASC26. The reversal of drug resistance in vitro at a concentration of 8 M showed that ASC26 could significantly increase the sensitivity of the tumor resistant cells with high expression of ABCB1 to Taxol (ABCB1 substrate), while the antitumor activity of cisplatin (non ABCB1 substrate) was not significantly affected. In addition, ASC26 did not reverse the reversal of resistance to ABCG2 overexpressed drug-resistant cells. The effect of.4. on the effect of ASC26 on the accumulation and excretion of paclitaxel in ABCB1 high expression of tumor resistant cells and their parent cells by high performance liquid phase method. The results showed that ASC26 could significantly increase the accumulation of taxol in the tumor resistant cells with high expression of ABCB1, and inhibit the outer row of paclitaxel by the high expression of ABCB1. Intracellular paclitaxel content, but no significant effect on the accumulation and outer row of paclitaxel in the parent tumor cells.5. flow cytometry was used to detect the effect of ASC26 on the accumulation of Luo Danming (Rho123) in SW620/Ad300 cells with high expression of ABCB1. The results showed that ASC26 could significantly increase the retention rate of Rho123 in SW620/Ad300 cells, but Rho12 in the parent SW620 cell Rho12. The effect of the accumulation of 3 on the expression of ABCB1 transporter protein in SW620/Ad300 cells by.6. immunofluorescence was not significantly affected by.ASC26 on SW620/Ad300 cell 72 h, and the effect of ASC26 on the ABCB1 expression site was detected by immunofluorescence. The results showed that ASC26 did not change the ABCB1 protein expression loci in the cells. The effect of C26 on the expression level of ABCB1 protein. The result of Western blot shows that ASC26 acts on SW620/Ad300 resistant cells 0 h, 24 h, 48 h, and 72h, it does not change the ABCB1 protein expression level in the cell and the interaction relationship between the.9. molecular docking experiment and the human homologous molecular model. 6 can bind to the drug binding pocket of the transmembrane domain of the ABCB1 transporter, which inhibits the translocation of ABCB1 against chemotherapeutic agents. A selective ABCB1 inhibitor, a new steroid compound, ASC26, can be found to reverse the ABCB1 mediated swelling resistance of the tumor significantly in the non toxic concentration. Further mechanism studies show the inverse of ASC26 The mechanism of trans resistance is to inhibit the efflux transport of the ABCB1 transport pump, not by affecting the protein expression of ABCB1 to reverse the resistance of.ASC26 to the drug binding pocket of the trans membrane domain of the ABCB1 transporter, inhibit the use of ABCB1 against tumor drugs, and increase the concentration of intracellular antitumor drugs. To improve the sensitivity of tumor cells to chemotherapeutic drugs and to reverse the effect of tumor resistance, this research will provide a new research scheme and model for solving the problem of tumor resistance.
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R96

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 謝佐福;腫瘤細胞耐藥性的胞外影響機制[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);1996年03期

2 張萬岱,肖冰,張振書;腫瘤細胞耐藥的哲學內(nèi)涵[J];醫(yī)學與哲學;2000年12期

3 姜夕鋒,徐功立;腫瘤細胞耐藥表型及其機制的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2001年05期

4 張萍,王大章,鄭光勇,劉曙光;熱療對腫瘤細胞耐藥性的影響[J];華西口腔醫(yī)學雜志;2003年02期

5 王鑫;王潔;張燕;高志光;;腫瘤細胞耐藥機制的研究進展[J];癌癥進展;2007年01期

6 趙躍然;王美嶺審校;;腫瘤細胞耐藥性的分子生物學[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);1991年04期

7 楊純正;;腫瘤細胞耐藥基因表達的意義及其逆轉(zhuǎn)新策略[J];醫(yī)學研究通訊;2001年04期

8 楊純正;腫瘤細胞耐藥基因研究進展[J];中國腫瘤;1996年07期

9 何明生;熱休克蛋白與腫瘤細胞耐藥[J];中國實驗血液學雜志;1998年03期

10 楊純正;;腫瘤細胞耐藥基因研究進展[J];醫(yī)學研究通訊;1998年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李春海;陳高明;田方;程國軍;孫麗亞;;腫瘤細胞耐藥機理研究進展[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

2 王玉芝;付東;史兆興;張彥彬;;細胞膜磷脂在腫瘤細胞耐藥性中的作用及可能機制探討[A];第七屆全國生物膜學術(shù)討論會論文摘要匯編[C];1999年

3 朱虹;楊□;楊曉春;趙玉勤;薛濤;王金成;何俏軍;楊波;;低氧自噬引起的腫瘤細胞耐藥機制研究[A];2011醫(yī)學科學前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學術(shù)會議論文集[C];2011年

4 蔡霈;方唯碩;;一種能抑制腫瘤細胞耐藥的新型紫杉烷化合物[A];2013醫(yī)學前沿論壇暨第十三屆全國腫瘤藥理與化療學術(shù)會議論文集[C];2013年

5 張燕;徐珊;周建偉;;JWA通過誘導線粒體通路凋亡逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥性[A];第二屆中國醫(yī)學細胞生物學學術(shù)大會暨細胞生物學教學改革會議論文集[C];2008年

6 何暉;尹繼業(yè);徐雅靜;李曦;張瑜;徐瀟靜;鄭藝;陳娟;錢晨月;周宏灝;劉昭前;;ABCB1基因多態(tài)性與中危染色體核型急性髓細胞白血病治療結(jié)果的相關(guān)性研究[A];湖南省生理科學會2013年度學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2013年

7 湯海峰;易楊華;姚新生;;海洋甾體化合物的研究進展[A];中國生物化學與分子生物學會第八屆會員代表大會暨全國學術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

8 甘春芳;范良華;崔建國;黃燕敏;韋萬興;;-些具有[6-5-6-5]-甾核結(jié)構(gòu)甾體化合物的合成及抗腫瘤活性研究[A];2011年全國藥物化學學術(shù)會議——藥物的源頭創(chuàng)新論文摘要集[C];2011年

9 曾東林;黃志堅;;甾體化合物在畜牧獸醫(yī)學上的應用[A];2010年福建省畜牧獸醫(yī)學術(shù)年會論文集[C];2010年

10 何暉;尹繼業(yè);徐雅靜;李曦;張瑜;李湘平;王瑛;周宏灝;劉昭前;;ABCB1基因多態(tài)性與昂丹司瓊治療化療引起惡心、嘔吐的療效的相關(guān)性[A];湖南省生理科學會2013年度學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2013年

相關(guān)博士學位論文 前2條

1 周中軍;腫瘤細胞耐藥機理及其逆轉(zhuǎn)的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1993年

2 楊冬艷;血管緊張素Ⅱ與核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB對腫瘤細胞耐藥基因調(diào)控機制的研究[D];吉林大學;2007年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 楊東曉;甾體化合物ASC26對ABCB1介導的腫瘤細胞耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及其機制研究[D];鄭州大學;2017年

2 馮飛;三維培養(yǎng)腫瘤細胞耐藥性及放射敏感性的研究[D];蘇州大學;2015年

3 鐘進彥;中國漢族人群ABCB1基因啟動子甲基化與氯吡格雷藥效動力學的關(guān)聯(lián)研究[D];寧波大學;2015年

4 張燕;JWA通過線粒體凋亡通路影響腫瘤細胞耐藥性[D];南京醫(yī)科大學;2009年

5 張紅榴;微生物催化甾體化合物多步轉(zhuǎn)化反應的研究[D];天津科技大學;2013年

6 喻永林;P7抑制腫瘤生長及逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞耐藥的作用機制研究[D];暨南大學;2012年

7 韓志杰;甾體化合物衍生的β-內(nèi)酯類化合物的合成[D];天津大學;2010年

8 吉軒;芴衍生物及含芴環(huán)甾體化合物的合成研究[D];山西大學;2010年

9 周蓓;涉及腫瘤細胞耐藥行為的壓電電化學相關(guān)研究[D];湖南師范大學;2012年

10 李劍;吡啶環(huán)甾體化合物的合成及其結(jié)構(gòu)修飾研究[D];浙江工業(yè)大學;2007年

，

本文編號：2118469