為探究驢乳源溶菌酶特性,本研究人工合成了驢乳溶菌酶基因DKLYSC1,并連入原核表達(dá)載體pET32a(+)中經(jīng)誘導(dǎo)、表達(dá),通過SDS-PAGE、western blot及比濁法檢測重組溶菌酶表達(dá)及活性。結(jié)果顯示,重組溶菌酶主要以包涵體形式高效表達(dá),分子質(zhì)量約31 ku;純化的重組蛋白可以與抗His標(biāo)簽抗體特異性結(jié)合,特異性較強(qiáng);比濁法測定復(fù)性蛋白比酶活為124.74 U/mg。本研究在大腸桿菌中表達(dá)了驢乳溶菌酶,并獲得具有活性的復(fù)性蛋白,為驢乳溶菌酶的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

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【部分圖文】：

圖1pET32a-DKLYZC1載體的PCR鑒定（A）及酶切（B）鑒定

pUC59-DKLYSC1經(jīng)NcoI和XhoI雙酶切后，將獲得的目的片段克隆至原核表達(dá)載體pET32a（+），構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a-DKLYSC1。構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，在450bp左右獲得與目的片段大小一致的條帶（圖1A）；該質(zhì)粒經(jīng)NcoI和XhoI....

圖2重組蛋白DKLYSC1表達(dá)的SDS-PAGE檢測（A）及純化蛋白的westenblot鑒定（B)

重組蛋白N端帶有His標(biāo)簽，利用Ni柱參照包涵體蛋白純化方法獲得純化的重組包涵體蛋白。westernblot檢測結(jié)果顯示，在31ku處出現(xiàn)特異性條帶（圖2B）。表明重組蛋白DKLYSC1具有較強(qiáng)的反應(yīng)原性。將純化的重組蛋白利用尿素法進(jìn)行透析復(fù)性，獲得了純度高的復(fù)性蛋白，但濃度....

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