球蟲是對養(yǎng)雞業(yè)危害最大的病原體之一。盡管“以飼料廠為中心的藥物預(yù)防體系”對球蟲病控制和集約化養(yǎng)雞生產(chǎn)發(fā)展發(fā)揮了不可或缺的保障作用,但隨著雞球蟲抗藥性的普遍產(chǎn)生,迫切需要尋找新的藥物作用靶標(biāo)分子,開發(fā)新型藥物。其它寄生原蟲的研究業(yè)已表明,組蛋白去乙�；�(HDACs)是頗具應(yīng)用前景的藥物靶標(biāo)。HDAC3是I型HDACs家族的成員之一,主要作用于H2A、H4組蛋白等,是重要的藥物靶標(biāo)。對柔嫩艾美球蟲(Eimeria tenella)的HDAC3(EtHDAC3)的研究不僅能發(fā)現(xiàn)其在球蟲生活史調(diào)控機(jī)制中的作用,還可為研制新型抗球蟲藥、新型疫苗奠定理論基礎(chǔ)。 本研究通過生物信息學(xué)方法預(yù)測EtHDAC3基因并設(shè)計(jì)引物,以E. tenella廣東株裂殖子總RNA為模板,用RT-PCR方法獲得其序列,結(jié)果顯示克隆的序列由1200個(gè)核苷酸組成,編碼399個(gè)氨基酸。通過生物信息學(xué)方法對E.tenella進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析,結(jié)果顯示EtHDAC3具有完整的I型HDACs的結(jié)構(gòu)域,并與其它頂復(fù)門生物具有高度保守性,序列相似性達(dá)到90%左右。 本研究以原核表達(dá)載體pMAL-C2X構(gòu)建重組質(zhì)粒pMAL-C2X-...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 HDACs的功能
    1.2 HDACs分類與結(jié)構(gòu)
    1.3 HDACs的三維結(jié)構(gòu)和催化機(jī)理
    1.4 機(jī)體對HDACs的調(diào)控
    1.5 HDACs抑制劑
    1.6 HDACs在寄生原蟲中的研究進(jìn)展
        1.6.1 瘧原蟲的HDACs
        1.6.2 弓形蟲HDACs
        1.6.3 錐蟲HDACs
        1.6.4 溶組織內(nèi)阿米巴原蟲HDACs
        1.6.5 利什曼原蟲HDACs
    1.7 艾美耳球蟲HDACs研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 蟲種、菌株和載體
        2.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 引物
    2.2 方法
        2.2.1 EtHDAC3基因的克隆
        2.2.2 EtHDAC3基因的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.3 E.tenella不同發(fā)育階段EtHDAC3基因轉(zhuǎn)錄的變化
        2.2.4 利用同源模建和分子對接分析EtHDAC3和ChHDAC3的活性位點(diǎn)
3 結(jié)果
    3.1 EtHDAC3基因ORF的克隆
        3.1.1 EtHDAC3基因ORF的預(yù)測
        3.1.2 E.tenella第二代裂殖子總RNA提取結(jié)果
        3.1.3 EtHDAC3的RT-PCR結(jié)果
        3.1.4 轉(zhuǎn)化菌落的PCR鑒定
        3.1.5 測序結(jié)果
        3.1.6 EtHDAC3信號肽序列預(yù)測結(jié)果
        3.1.7 EtHDAC3 NLS和NES的預(yù)測
        3.1.8 各頂復(fù)門原蟲HDAC3氨基酸序列的比對結(jié)果
    3.2. EtHDAC3基因的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.1 帶有酶切位點(diǎn)的EtHDAC3基因的擴(kuò)增及鑒定
        3.2.2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        3.2.3 EtHDAC3基因的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果
        3.2.4 pMAL-C2X-EtHDAC3不同溫度的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.5 pMAL-C2X-EtHDAC3不同IPTG濃度的誘導(dǎo)表達(dá)
    3.3 E.tenella不同發(fā)育階段EtHDAC3基因轉(zhuǎn)錄的變化
        3.3.1 各個(gè)時(shí)期總RNA的提取結(jié)果
        3.3.2 引物的檢驗(yàn)
        3.3.3 EtHDAC3和β-actin的擴(kuò)增效率、標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線
        3.3.4 待測樣品EtHDAC3和β-actin Real-time RT-PCR結(jié)果
    3.4 利用同源模建和分子對接分析EtHDAC3和ChHDAC3的活性位點(diǎn)的差異
        3.4.1 ChHDAC3基因的擴(kuò)增及鑒定
        3.4.2 EtHDAC3和ChHDAC3的活性位點(diǎn)的分析
        3.4.3 同源建模
        3.4.4 分子對接
4 討論
    4.1 EtHDAC3的克隆與表達(dá)
    4.2 E.tenella不同發(fā)育階段EtHDAC3基因轉(zhuǎn)錄的變化
    4.3 利用同源模建和分子對接分析EtHDAC3和ChHDAC3的活性位點(diǎn)的差異
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3995135