隨著分子技術(shù)的發(fā)展和牛基因組計劃的初步完成,使得運用分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇(MAS)成為可能,單核苷酸多態(tài)性(SNP)作為分子標(biāo)記技術(shù)的熱點之一,肉牛育種工作者運用此技術(shù)來實現(xiàn)人們生活消費品質(zhì)為標(biāo)志的肉品質(zhì)性狀和肉牛生長狀態(tài)為標(biāo)志的胴體性狀兩個目標(biāo)的選育。此實驗通過分子生物學(xué)和生物信息學(xué)相結(jié)合,對65頭牛中UCP3和THRSP基因上的12個SNPs多態(tài)性與12個性狀之間進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析,同時測定兩個基因在不同大理石等級群體中的表達(dá)差異,得到了相關(guān)數(shù)據(jù),獲得了如下結(jié)果：1.利用測序和PCR-RFLP方法檢測到UCP3基因的5個SNPs,利用線性模型對5個SNP多態(tài)性位點基因型與胴體性狀和肉品質(zhì)性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)：UCP3第五內(nèi)含子的5個SNPs位點。(1)C786G位點CG型個體脂色等級和脂肪含量明顯高于CC型個體(P0.05)；位點CC型個體鮮肉水分含量明顯高于CG型個體(P0.05)。(2)C782G位點CG型個體脂色等級和脂肪含量明顯高于CC型個體(P0.05)；位點CC型個體鮮肉水分含量明顯高于CG型個體(P0.05)。(3)A559G位點AG型個體脂色等級和脂肪含量明顯高于AA型個體(P0.05)；位點AA型個體鮮肉水分含量明顯高于AG型個體(P0.05)。(4)C508T位點所對應(yīng)的各個性狀均未達(dá)到差異顯著。(5)G457T位點GT型個體屠宰前重、眼肌肉長、三角牛腩等級、背膘脂肪厚、脂色等級、肉色等級、大理石花紋等級明顯高于GG型個體(P0.05);GG型個體鮮肉水分含量高于GT型個體。2.利用測序和PCR-RFLP方法檢測到THRSP基因的7個SNP位點,利用線性模型對7個SNP多態(tài)性位點基因型與胴體性狀和肉品質(zhì)性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)：THRSP第一內(nèi)含子的6個SNP位點。(1)Intronl中A790C、A724G、T682C、T470C、G378A五個位點所對應(yīng)的各個性狀均未達(dá)到差異顯著。(2)Intronl中T448C位點TC型個體大理石花紋等級明顯高于TT型個體(P0.05)。(3)THRSP第一外顯子存在1個SNP位點A193G,此位點AA型對應(yīng)的鮮肉水含量明顯較高(P0.05);AG型個體脂肪含量較高(P0.05)。3.UCP3在大理石花紋等級差異明顯的兩組個體相應(yīng)表達(dá)量均無顯著差異(P0.05);THRSP在大理石花紋等級高的個體相應(yīng)表達(dá)量明顯高于等級低的個體(P0.05)。
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S823.92
文章目錄
摘要
1 前言
1.1 肉牛發(fā)展概況
1.2 UCP3、THRSP基因的研究進(jìn)展
1.2.1 UCP3基因研究進(jìn)展
1.2.2 THRSP基因研究進(jìn)展
1.3 三種常見的SNP檢測方法概述
1.3.1 SNP標(biāo)記在家畜育種中的應(yīng)用
1.3.2 測序法
1.3.3 PCR-RFLP方法
1.3.4 PCR-SSCP方法
1.4 熒光定量PCR概述
1.4.1 熒光定量PCR的簡介
1.4.2 熒光定量PCR的基本原理
1.4.3 熒光定量PCR定量分析的兩種方法
1.4.4 熒光定量PCR的優(yōu)點
1.5 本實驗的研究內(nèi)容及意義
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.1.1 實驗動物
2.1.2 實驗主要試劑耗材
2.1.3 實驗主要儀器設(shè)備
2.1.4 常用溶液及試劑的配制
2.1.5 主要分子生物學(xué)數(shù)據(jù)庫及分析軟件
2.2 實驗方法
2.2.1 實驗動物屠宰及分割
2.2.2 評價指標(biāo)和計算方法
2.2.3 肌內(nèi)脂肪含量測定方法
2.2.4 引物設(shè)計及分析軟件
2.2.5 UCP3基因與THRSP基因SNP位點的確定
2.2.6 利用實時熒光定量PCR技術(shù)對肌肉UCP3基因和THRSP基因的mRNA進(jìn)行相對定量
2.2.7 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
3.1 總DNA提取結(jié)果
3.2 UCP3與THRSP基因DNA部分片段擴(kuò)增結(jié)果鑒定
3.3 UCP3與THRSP基因SNPs位點的檢測及關(guān)聯(lián)分析
3.3.1 UCP3基因SNPs位點的確認(rèn)及關(guān)聯(lián)分析
3.3.2 THRSP基因SNPs位點的確認(rèn)及關(guān)聯(lián)分析
3.4 牛的總RNA檢測
3.5 UCP3、THRSP、B-ACTIN基因DNA部分片段擴(kuò)增結(jié)果檢測
3.6 UCP3、THRSP基因相對定量標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線
3.7 UCP3、THRSP基因相對表達(dá)量及相關(guān)分析
3.7.1 UCP3基因mRNA表達(dá)量測定結(jié)果
3.7.2 THRSP基因mRNA表達(dá)量測定結(jié)果
4 討論
4.1 全文討論
4.2 實驗動物背景討論
4.3 實時熒光定量PCR技術(shù)討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
Abstract
附錄1
附錄2
致謝
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號：
1592402
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