發(fā)布時間：2020-11-22 02:19

　　 隨著我國養(yǎng)牛業(yè)集約化養(yǎng)殖不斷加快,犢牛腹瀉防控已成為亟待解決的重要問題。微小隱孢子蟲(Cryptosporidium parvum)是重要的人獸共患機會性致病原蟲,是目前公認的引起犢牛腹瀉的四種主要病原之一,在世界范圍內流行廣泛。牛被認為是導致人類人畜共患微小隱孢子蟲病的主要宿主,且與許多人類介水隱孢子蟲病的爆發(fā)有關,具有較大的人獸共患風險。本研究從奶牛業(yè)生產(chǎn)實際出發(fā),對新疆部分地區(qū)新生犢牛微小隱孢子蟲進行流行病學調查,掌握新生犢牛微小隱孢子蟲的感染情況及流行特點,可為了解微小隱孢子蟲在動物和人之間傳播的潛在危害性、傳播動態(tài),以及為我國新疆奶牛源微小隱孢子蟲流行病學研究及防治提供基礎資料。(1)于2017年9月至2018年7月期間,采用飽和蔗糖溶液漂浮法、改良抗酸染色法、巢式PCR、PCR-RFLP分析和隱孢子蟲SSU rRNA基因序列分析,對新疆烏什、阿拉爾、溫宿、石河子、呼圖壁、鐵門關和奎屯7個地區(qū)12個集約化奶牛養(yǎng)殖場232頭1月齡內新生犢牛糞便進行微小隱孢子蟲感染情況調查。顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)隱孢子蟲直徑4~6μm,具有藍紫色的折光性,呈卵球形或橢圓形,具有1個大的殘體和4個子孢子;經(jīng)改良抗酸染色法染色后,隱孢子蟲卵囊呈玫瑰紅色,周邊背景呈淡藍色�；�于SSU rRNA基因對12個奶牛場的232頭1月齡內新生犢牛糞便DNA樣品進行巢式PCR擴增,隱孢子蟲總體感染率38.4%,微小隱孢子蟲感染率為37.9%,研究發(fā)現(xiàn)腹瀉和未腹瀉犢牛之間微小隱孢子蟲感染率在統(tǒng)計學上存在極顯著差異(P0.001)�；�于SSU rRNA基因的RFLP分析和序列分析,共鑒定出3種隱孢子蟲蟲種:微小隱孢子蟲、牛隱孢子蟲和瑞氏隱孢子蟲,其中微小隱孢子蟲是優(yōu)勢感染蟲種,在研究區(qū)域新生犢牛中普遍存在,具有較大的人獸共患風險。(2)于2017年9月至2018月9月期間,對新疆南疆阿克蘇地區(qū)兩規(guī)�；�牛場進行了1年的跟蹤調查,采用方差齊性分析發(fā)現(xiàn)微小隱孢子蟲感染率季節(jié)性差異不明顯(P0.05),十團牛場微小隱孢子蟲感染無季節(jié)差異(P0.05),五團牛場夏季和冬季微小隱孢子蟲感染率存在差異(P=0.044)。
【學位單位】：塔里木大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S858.23
【部分圖文】：

圖 2-1 新疆部分地區(qū)新生犢牛糞便樣品地理分布phical origins of faecal samples from neonatal calves in part及溶液表 2-1 主要試劑Table 2-1 Main reagents試劑名稱es of Reagents生產(chǎn)廠Manufapotassium dichromate) 天津福晨化學試L2000Marker 大連 TaKabo II 限制性內切酶 大連 TaKaiew I 型核酸染料 北京博奧拓達科PCR Super Mix (+dye) 北京全式金生物. Stool DNA Kit 美國 Omega B瓊脂糖 美國 Sigma-A

下隱孢子蟲的檢出率較低。采用飽和蔗糖溶液漂浮法，對232份新生犢牛糞便樣品進行檢查，結果發(fā)現(xiàn)，最早可在4日齡犢牛糞便中檢測到隱孢子蟲卵囊。在飽和蔗糖溶液中，隱孢子卵囊呈近卵圓形，呈現(xiàn)淡藍紫色，周圍藍綠色折光帶明顯，見圖2-2；經(jīng)改良酸染色法染色后，隱孢子蟲卵囊呈玫瑰紅色，周邊背景呈淡藍色，對比明顯，見圖2-3。圖 2-2 飽和蔗糖溶液中隱孢子蟲 圖 2-3 經(jīng)改良抗酸染色的隱孢卵囊形態(tài)觀察(400 ×) 子蟲卵囊形態(tài)觀察(1000 ×)Figure2-2 Morphological observation Figure2-3 Morphological observation ofof Cryptosporidium oocysts in saturated Cryptosporidium oocysts stained bysucrose solution flotation(400 ×) improved acid-fast staining(1000 ×)

結果發(fā)現(xiàn)，最早可在4日齡犢牛糞便中檢測到隱孢子蟲卵囊。在飽和蔗糖溶液中，隱孢子卵囊呈近卵圓形，呈現(xiàn)淡藍紫色，周圍藍綠色折光帶明顯，見圖2-2；經(jīng)改良酸染色法染色后，隱孢子蟲卵囊呈玫瑰紅色，周邊背景呈淡藍色，對比明顯，見圖2-3。圖 2-2 飽和蔗糖溶液中隱孢子蟲 圖 2-3 經(jīng)改良抗酸染色的隱孢卵囊形態(tài)觀察(400 ×) 子蟲卵囊形態(tài)觀察(1000 ×)Figure2-2 Morphological observation Figure2-3 Morphological observation ofof Cryptosporidium oocysts in saturated Cryptosporidium oocysts stained bysucrose solution flotation(400 ×) improved acid-fast staining(1000 ×)
【參考文獻】

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1 王臣榮;齊萌;李俊強;張振杰;劉鵬飛;余復昌;曹建科;寧長申;張龍現(xiàn);;規(guī)模化引種場進口奶牛隱孢子蟲種類、基因亞型鑒定及其生物安全評價[J];中國人獸共患病學報;2015年11期

2 方艷琴;杜帥之;郭雅旭;林青;趙光輝;;不同Ⅱd亞型微小隱孢子蟲對BALB/c小鼠的感染性[J];西北農業(yè)學報;2014年12期

3 曹斌斌;趙勐;林濤;馬翀;曹杰;齊長明;;犢牛腹瀉病因及治療方法[J];中國奶牛;2012年05期

本文編號：2893952