溶血性曼氏桿菌是動(dòng)物上呼吸道中共生的常在菌,當(dāng)存在環(huán)境壓力或應(yīng)激等因素時(shí),大量增殖,引起嚴(yán)重的呼吸道感染,且易與病毒和其他細(xì)菌混合感染或繼發(fā)感染。目前,在一些集約牛場(chǎng)中普遍存在,導(dǎo)致重要的經(jīng)濟(jì)損失。國(guó)外主要采用多價(jià)或多聯(lián)滅活疫苗進(jìn)行免疫,效果評(píng)價(jià)不一。我國(guó)尚缺乏預(yù)防該病的疫苗。本研究從嚴(yán)重呼吸道癥狀的發(fā)病牛和病死牛肺臟和鼻拭子中分離鑒定獲得致病菌株,建立小鼠感染模型,進(jìn)而研制滅活疫苗,確定其安全性和免疫原性,對(duì)于規(guī)�；�(chǎng)該病的預(yù)防具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。首先無(wú)菌采集黑龍江省三地牛場(chǎng)發(fā)病牛的肺臟和鼻拭子,經(jīng)病原分離培養(yǎng)、染色鏡檢、生化試驗(yàn)、PCR鑒定、血清型和毒力因子檢測(cè),確定分離株的生物學(xué)特性。以鼻腔、腹腔途徑,分別采用不同劑量的分離菌株接種清潔級(jí)昆明系小白鼠,確定最佳接種方式和致病性,建立小鼠感染模型。選擇制備疫苗的致病菌與攻毒菌株,優(yōu)化培養(yǎng)基和滅活條件,制備蜂膠佐劑、鋁佐劑、206佐劑滅活疫苗。小鼠間隔三周皮下接種疫苗2次,通過(guò)攻毒試驗(yàn)、ELISA抗體檢測(cè)、細(xì)胞因子QRT-PCR檢測(cè)等方法確定疫苗的安全性和免疫效力。本研究成功分離鑒定三株有較強(qiáng)致病性的溶血性曼氏桿菌,分別命名為JS0...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖2-1溶血性曼氏桿菌接種血瓊脂平板培養(yǎng)基Fig.2-1M.haemolyticawasinoculatedontobloodagar

圖2-1溶血性曼氏桿菌接種血瓊脂平板培養(yǎng)基Fig.2-1M.haemolyticawasinoculatedontobloodagar

圖2-2溶血性曼氏桿菌革蘭氏染色Fig.2-2GramstainingofM.haemolytica

圖2-2溶血性曼氏桿菌革蘭氏染色Fig.2-2GramstainingofM.haemolytica結(jié)果為：葡萄糖、果糖、甘露醇、麥芽糖、

圖2-3分離菌株16SrDNAPCR擴(kuò)增結(jié)果

圖2-3分離菌株16SrDNAPCR擴(kuò)增結(jié)果M:2000Marker;1:JS0165;2:LY02;3:WC16493Fig.2-3PCRamplificationresultsof16SrDNAgeneM:2000Marker;....

圖2-4分離菌株分型引物擴(kuò)增結(jié)果

18圖2-4分離菌株分型引物擴(kuò)增結(jié)果M：1000Marker;1：JS0165(A6)；2：LY02(A6)；3：WC16493（A1）Fig.2-4PCRamplificationresultsoftheserotypetypingM:1000M....

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