發(fā)布時間：2024-06-24 19:19

　　Y染色體在動物性別決定和精子發(fā)生過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,Zfy基因位于Y染色體短臂上,編碼鋅指蛋白,最新研究中被確認(rèn)決定圓形精子能否最終發(fā)育成為可供自然受精的精子,與Y精子的正常發(fā)生有關(guān)。馬鹿作為特種經(jīng)濟(jì)動物在新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)有多年養(yǎng)殖歷史,馬鹿養(yǎng)殖效益核心是鹿茸的銷售,公鹿的大量繁殖和飼養(yǎng)是鹿場主要運(yùn)營模式。然而鹿茸市場波動頻繁,去母留公在鹿茸市場疲軟時屬于常態(tài),而隨著市場轉(zhuǎn)暖,通過控制馬鹿后代性別,在短時間內(nèi)多生母鹿達(dá)到快速擴(kuò)繁的目的,當(dāng)母鹿存欄量達(dá)到一定基數(shù)時再控制多生公鹿,是鹿場在市場激烈競爭中降低成本提高收益的重要手段。目的:設(shè)計馬鹿Zfy基因shRNA片段,構(gòu)建并篩選出高效馬鹿Zfy基因shRNA表達(dá)載體,將所篩選出的重組載體注射進(jìn)種公鹿睪丸內(nèi),以期在配種時間內(nèi)干擾、抑制睪丸內(nèi)Zfy基因表達(dá),影響Y精子的正常生成,而不影響X精子的生成,為X精子提供更多的受精機(jī)會,從而達(dá)到多生母鹿的效果。方法:(1)對馬鹿Zfy基因mRNA序列進(jìn)行siRNA設(shè)計和篩選,將篩選出的siRNA分別連接到RNA干擾真核表達(dá)載體中,將構(gòu)建好的重組表達(dá)載體進(jìn)行馬鹿體外生精細(xì)胞培養(yǎng)RNAi試驗(yàn),利用...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1PGenesil1.3表達(dá)載體圖譜

圖1-1PGenesil1.3表達(dá)載體圖譜Fig1-1TheRestrictionMapofPGenesil1.3NA序列的設(shè)計和篩選據(jù)馬鹿Zfy基因（GenBank：KU041539.1），通過Gene.exe基因序列分

圖1-2引物擴(kuò)增方向Fig1-2Directionofprimeramplification

每2個shRNA共用一個表達(dá)載體，與常規(guī)單位點(diǎn)質(zhì)粒載體不同，所插入得2個shRNA，需要設(shè)計兩對引物，其中A與B引物，擴(kuò)增TTTTTT---Mir305’之間序列；C與D引物，擴(kuò)增Mir303’---U6之間序列，引物擴(kuò)增序列方向如圖1-2所示：圖1-2引物擴(kuò)增方向Fig1....

圖1-3兩對引物擴(kuò)增結(jié)果

25圖1-3兩對引物擴(kuò)增結(jié)果Fig1-3Amplificationresultsoftwopairsofprimers3.3連接反應(yīng)結(jié)果及質(zhì)粒命名兩組PCR產(chǎn)物純化后經(jīng)BsaI酶切，T4連接酶4℃放置過夜連接，為方便記錄將連接產(chǎn)物ZFY202+17591P2....

圖1-4重組質(zhì)粒酶切結(jié)果

由于PGenesil1.3表達(dá)載體具有1個PstI的酶切位點(diǎn)，所設(shè)計PCR引物中加入了1個PstI，所以用PstI內(nèi)切酶對重組質(zhì)粒1和重組質(zhì)粒2進(jìn)行酶切，可以切出一條約1800bp大小條帶，說明目的基因片段已經(jīng)分別插入到質(zhì)粒載體中(如圖1-4所示)。圖1-4重組質(zhì)粒酶切結(jié)果Fi....

本文編號：3995652