發(fā)布時(shí)間：2020-11-15 13:34

　　 本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞培養(yǎng)、光鏡、RT-PCR、基因擴(kuò)增和測(cè)序、動(dòng)物感染模型構(gòu)建、組織病理學(xué)、免疫組化等多種研究方法,在BHK-21細(xì)胞系中增殖本實(shí)驗(yàn)室分離得到新型鴨源性呼腸孤病毒分離株(Novel Duck Reovirus,NDRV)JZ061214株、HP080421株、HP081122株、HP09318株和YM101120株,挑選其中一株NDRV HP080421株,進(jìn)行全基因組測(cè)序及分析,接著對(duì)5株毒株的S1基因擴(kuò)增及序列測(cè)定和分析,以及挑選這5株毒株中遺傳差異較大的3株感染櫻桃谷雛鴨,研究對(duì)雛鴨致病性的差異。1.HP080421株全基因組測(cè)序及分析得到全基因組序列(23419bp),有10個(gè)節(jié)段,各個(gè)節(jié)段的同源性最高的均為NDRV,與NDRV SD-12株和091株的親緣關(guān)系最近。2.5株NDRV的S1基因擴(kuò)增及序列測(cè)定和分析擴(kuò)增出了約1586bp的節(jié)段,5株毒株S1基因的核苷酸序列與NDRV的同源性均在90%以上,而5株DRV與MDRV和ARV同源性分別為35.0%-37.4%和43.2%-45.3%。分析S1基因的進(jìn)化樹(shù),JZ061214株與NDRV SD-12株親緣關(guān)系最近,與HP09318株,HP081122株,HP080421株和YM101120存在一定的遺傳距離。3.3株NDRV對(duì)櫻桃谷雛鴨致病性差異研究NDRV JZ061214株、HP09318株和YM101120株感染7d櫻桃谷鴨,部分鴨眼角出現(xiàn)淚痕,剖檢病變類(lèi)似,表現(xiàn)為脾腫大,脾表面可見(jiàn)大小不一的黃白色病灶;JZ061214組病變最為嚴(yán)重,YM101120組感染后5d和7d,黃、白斑點(diǎn)消失。組織病理學(xué)觀察,脾表現(xiàn)為出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞壞死;法氏囊病變表現(xiàn)為淋巴濾泡和淋巴濾泡內(nèi)的淋巴細(xì)胞減少;胸腺表現(xiàn)為胸腺小體周?chē)�出現(xiàn)壞死灶。用免疫組織化學(xué)檢測(cè)感染后組織中病毒含量,發(fā)現(xiàn)在感染后3d和5d,脾的病毒滴度最高,3株毒株的脾中病毒含量最高的是JZ061214株,剩余兩種病毒含量接近。
【學(xué)位單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：S858.32
【部分圖文】：

圖 11 5 株新型鴨呼腸孤病毒 S1 基因擴(kuò)增電泳圖 maker；1，2，3，4 和 5 分別是感染組 HP09318，HP080421，HP081122，和 JZ061214 病毒株 S1 基因擴(kuò)增結(jié)果；6：陰性對(duì)照。Fig.11 Amplification of S1 gene from five novel duck reovirus strains maker；1,2,3,4,5：Amplification products of S1 gene in infected group of HHP080421，HP081122，YM101120 and JZ061214;6:the control group.因序列的分析 基因同源性比較年研究發(fā)現(xiàn)呼腸孤病毒基因組中 S1基因的變異程度最高，為了明毒 HP09318株，HP080421株，HP081122株，YM101120株和 JZ06源呼腸孤病毒同源性的關(guān)系，本研究選取了 MDRV 毒株（ZJ20）、ARV 毒株（138株和 S1133株）、NDRV 毒株（SD-12株和

新型鴨呼腸孤病毒基因組序列解析及其對(duì)雛鴨致病性差異的病理學(xué)研究3 新型鴨呼腸孤病毒 JZ061214 株、HP09318 株和 YM101120株對(duì)雛鴨的致病性3.1 臨床癥狀和眼觀病理變化分析 NDRV HP09318 株、HP080421 株、HP081122 株、YM101120 株和 JZ061214株的 S1 基因及其編碼的蛋白σC 基因的核苷酸序列的遺傳進(jìn)化樹(shù)，與其他報(bào)道的NDRV TH11 株，SD-12 株等處于同一進(jìn)化分支，并根據(jù)這 5 株病毒的σC 蛋白基因核苷酸序列的遺傳進(jìn)化樹(shù)親緣性遠(yuǎn)近，挑選了其中差異較大 NDRV JZ061214 株、HP09318 株和 YM101120 株感染雛鴨，研究它們對(duì)雛鴨的致病性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，整個(gè)動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)期間，無(wú)雛鴨自然死亡，感染組雛鴨只顯出短暫的疲態(tài)和食欲不振，除此之外，部分鴨眼角出現(xiàn)淚痕，其余外觀未出現(xiàn)明顯異常，如圖 14，圖 15 所示。

新型鴨呼腸孤病毒基因組序列解析及其對(duì)雛鴨致病性差異的病理學(xué)研究3 新型鴨呼腸孤病毒 JZ061214 株、HP09318 株和 YM101120株對(duì)雛鴨的致病性3.1 臨床癥狀和眼觀病理變化分析 NDRV HP09318 株、HP080421 株、HP081122 株、YM101120 株和 JZ061214株的 S1 基因及其編碼的蛋白σC 基因的核苷酸序列的遺傳進(jìn)化樹(shù)，與其他報(bào)道的NDRV TH11 株，SD-12 株等處于同一進(jìn)化分支，并根據(jù)這 5 株病毒的σC 蛋白基因核苷酸序列的遺傳進(jìn)化樹(shù)親緣性遠(yuǎn)近，挑選了其中差異較大 NDRV JZ061214 株、HP09318 株和 YM101120 株感染雛鴨，研究它們對(duì)雛鴨的致病性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，整個(gè)動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)期間，無(wú)雛鴨自然死亡，感染組雛鴨只顯出短暫的疲態(tài)和食欲不振，除此之外，部分鴨眼角出現(xiàn)淚痕，其余外觀未出現(xiàn)明顯異常，如圖 14，圖 15 所示。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2884811