發(fā)布時(shí)間：2020-11-11 06:51

　　 佐劑(adjuvant)是疫苗中的重要有效成分,能提高抗原的免疫原性,從不同途徑促進(jìn)免疫,在減少抗原使用的同時(shí)達(dá)到預(yù)期的免疫保護(hù)效果�，F(xiàn)今為止,獸用疫苗常用佐劑主要為油佐劑、鋁鹽佐劑等,接種含此類佐劑的疫苗后表現(xiàn)出毒性大、作用方式單一和佐劑成分不能代謝等缺點(diǎn),從而導(dǎo)致接種疫苗的動(dòng)物產(chǎn)生不良應(yīng)或不能達(dá)到預(yù)期保護(hù)效果。本研究主要目的是尋求低毒、高效的天然免疫佐劑。選擇黃芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)、人參多糖(Ginseng polysaccharide,GPS)、桑黃多糖(Mulberry polysaccharide,MPS)、香菇多糖(Lentinan,LNT)、木鱉子多糖(Hibiscus polysaccharide,HPS)、茯苓多糖(LBPS)、云芝多糖(Yunzhi polysaccharide,YPS)七種作為研究對(duì)象。通過提純,理化性質(zhì)檢測(cè),安全性評(píng)價(jià)免疫接種劑量的確定,免疫調(diào)節(jié)作用的比較后,篩選出效果較好的APS、GPS、LBPS和YPS。優(yōu)化四種多糖的比例后復(fù)合成多糖配方(Complex polysaccharides,CPS),探究CPS作為佐劑的可行性。七種多糖通過酶解、萃取、凍干等工藝提純,提純后的多糖在Balb/c小鼠模型中探究最佳免疫劑量并進(jìn)行安全性評(píng)價(jià),結(jié)果表明:提純后七種多糖的總糖含量分別為:APS 94.1%、GPS 83.5%、MPS 91.4%、HPS 88.9%、LBPS 78.5%、YPS 81.1%、LNT 92.6%,最佳免疫劑量分別為APS 250μg/mL、GPS 375μg/mL、MPS 750μg/mL、HPS 125μg/mL、LBPS 125μg/mL、YPS 500μg/mL、LNT 500μg/mL。其中HPS因含有木鱉子皂苷在注射劑量超過2.5 mg/Kg時(shí)對(duì)注射部位表現(xiàn)出毒性作,其余各組均無毒性。在小鼠模型上以特異性抗體水平評(píng)價(jià)體液免疫,以分泌的IFN-γ和IL-12等細(xì)胞因子評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫探究各種多糖對(duì)豬O型口蹄疫OS/99毒株滅活純化抗原的免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果,同劑量二免后,含有LBPS、GPS、LNT、APS、YPS比MPS和LNT組的抗體水平高,與抗原稀釋液的陰性對(duì)照相比效果更佳,且差異顯著(p0.05)。根據(jù)小鼠血清中細(xì)胞因子模式,提示APS既能促進(jìn)體液免疫又增進(jìn)細(xì)胞免疫,LBPS、YPS促促進(jìn)細(xì)胞免疫反應(yīng),GPS、HPS、MPS促進(jìn)體液免疫。在剔除作用較弱的MPS和LNT以及細(xì)胞毒性較強(qiáng)的HPS后,以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(豬模型)篩選復(fù)合多糖配方。低中高劑量三個(gè)水平復(fù)合多糖經(jīng)免疫動(dòng)物并較免疫效果,確定較佳配方為中劑量組,又通過單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化配方中四種多糖組分的含量,得到CPS,CPS多糖總含量為32.5 g/L,其中含APS 7.5 g/L、GPS 11.25 g/L、LBPS 3.75 g/L、YPS 10 g/L,為了保證多糖溶解更徹底,添加0.5%的非離子表面活性劑吐溫80促溶,添加0.05%卡波姆971P增加佐劑黏度,此復(fù)合多糖佐劑既具有延緩吸收又能促進(jìn)不溶性添加物永久性懸浮,從而增加了疫苗的穩(wěn)定性。CPS作為免疫佐劑配制FMDV滅活疫苗,用ISA206和ISA50V作為對(duì)照,二免疫動(dòng)物后測(cè)定血清抗體效價(jià)。結(jié)果表明CPS組的血清抗體效價(jià)均達(dá)到免疫保護(hù)的效價(jià)要求,與ISA206無顯著差異(P0.05),細(xì)胞因子模式分析結(jié)果表明該佐劑既促進(jìn)體液免疫,又能促進(jìn)細(xì)胞免疫,細(xì)胞免疫效果顯著高于兩組陽性對(duì)照,且差異顯著(P0.05)。CPS作為免疫增強(qiáng)劑稀釋抗原,與ISA206、ISA50V乳化配苗,動(dòng)物免疫結(jié)果表明,CPS作為免疫增強(qiáng)劑能彌補(bǔ)油佐劑促進(jìn)細(xì)胞免疫反應(yīng)能力弱的缺陷。CPS作為口蹄疫滅活疫苗免疫佐劑和免疫增強(qiáng)劑具有一定推廣價(jià)值。
【學(xué)位單位】：西北民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S859.797
【部分圖文】：

LBPS.LBPS 注射劑量與 3 種細(xì)胞因子總體上呈現(xiàn)效量關(guān)系，由圖 3-5 可知，LBPS 在注射劑量為 125 μg/mL，不同時(shí)間段血清中 IL-4、IFN-γ 和 TNF-α 含最高。LBPS 的最佳注射劑量為 125 μg/mL。（6）MPS 最佳注射劑量

3-8. 注射 HPS 后注射部位觀察（50. Observation of injection site after HPS 圖 3-9.注射 HPS 小鼠皮下組織解剖觀ion of subcutaneous tissue anatomy of m 1000μg/mL 時(shí)，給藥 5d 后開始出現(xiàn)精神面貌不佳，14 d 時(shí)皮下組織壞死組織大面積壞死如圖 3-9 ，肝臟腫大射部位大面積壞死，小鼠精神沉郁，，剖解癥狀與上相似；500μg/mL 給藥

圖 3-9.注射 HPS 小鼠皮下組織解剖觀tion of subcutaneous tissue anatomy of m 1000μg/mL 時(shí)，給藥 5d 后開始出現(xiàn)精神面貌不佳，14 d 時(shí)皮下組織壞死組織大面積壞死如圖 3-9 ，肝臟腫大注射部位大面積壞死，小鼠精神沉郁，，剖解癥狀與上相似；500μg/mL 給藥部壞死，如圖：3-8 所示，實(shí)驗(yàn)組小鼠積占皮下組織 1/5，剖檢發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟L 注射 HPS，給藥后 5d 注射部位輕皮跡象；62.5μg/mL 注射后，不出現(xiàn)壞死器，無黃疸等特征。個(gè)水平組均無死亡，飲水增加（注射，飲食正常，活動(dòng)增加（表現(xiàn)為爬籠時(shí)均正常。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2878888