【摘要】 小柴胡湯首見(jiàn)于《傷寒雜病論》,是治療少陽(yáng)證的經(jīng)典名方。因少陽(yáng)證癥狀“胸脅痞滿,默默不欲飲食,心煩喜嘔”等與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的抑郁癥癥狀相似,提示小柴胡湯可能具有抗抑郁作用；臨床實(shí)踐中有運(yùn)用小柴胡湯治療抑郁癥的報(bào)道。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)小柴胡湯具有增加大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的作用,然而系統(tǒng)地對(duì)小柴胡湯抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究卻鮮有報(bào)道。本文擬采用多種抑郁癥動(dòng)物模型,對(duì)小柴胡湯的抗抑郁作用進(jìn)行研究,并結(jié)合抑郁癥發(fā)病機(jī)制在神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和雌性激素方面的新進(jìn)展,采用多種藥理學(xué)手段,從行為、神經(jīng)生化、蛋白等水平對(duì)其抗抑郁作用機(jī)制進(jìn)行探討。首先研究了小柴胡湯在小鼠行為絕望模型中抗抑郁作用的量效和時(shí)效關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)小柴胡湯臨床等效量(7g/kg)在小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中均顯著縮短不動(dòng)時(shí)間,1/3臨床等效量(2.3g/kg,小鼠；1.7g/kg,大鼠)的小柴胡湯均縮短強(qiáng)迫游泳實(shí)中不動(dòng)時(shí)間,并且對(duì)自主活動(dòng)無(wú)顯著影響,其中給藥2周時(shí)藥效最佳,提示小柴胡湯對(duì)大小鼠行為絕望模型均具有抗抑郁作用。為進(jìn)一步確認(rèn)小柴胡湯的抗抑郁作用,本文采用藥物誘發(fā)所致抑郁模型進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)小柴胡湯可顯著抑制利血平誘導(dǎo)的小鼠體溫降低和眼瞼下垂癥狀,并可以顯著增加5-HTP誘導(dǎo)的小鼠甩頭次數(shù),說(shuō)明小柴胡湯具有抗抑郁作用且其機(jī)制與調(diào)節(jié)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平尤其提高腦內(nèi)5-HT含量有關(guān)。為探討小柴胡湯抗抑郁的神經(jīng)遞質(zhì)機(jī)制,采用HPLC-ECD方法發(fā)現(xiàn)小柴胡湯顯著增加行為絕望模型小鼠和大鼠海馬、皮層和紋狀體內(nèi)的DA、5-HT及其代謝產(chǎn)物DOPAC和5HIAA的含量,并且降低DA/DOPAC和5-HT/5-HIAA的值；隨后采用腦微透析結(jié)合HPLC-FLD法檢測(cè)大鼠海馬內(nèi)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì),發(fā)現(xiàn)小柴胡湯顯著降低大鼠海馬透析液中Glu的含量。說(shuō)明小柴胡湯在行為絕望模型中體現(xiàn)的抗抑郁作用與維持腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的穩(wěn)態(tài)有關(guān)。本文采用多種不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激(Chronic unpredictable mild stress, CUMS)制備大鼠抑郁模型,進(jìn)行了小柴胡湯抗抑郁藥效的確認(rèn),并從神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子角度探索小柴胡湯的抗抑郁作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)小柴胡湯顯著逆轉(zhuǎn)了CUMS引起的大鼠自主活動(dòng)的減少、糖水偏愛(ài)的降低和攝食量的下降,同時(shí)抑制了CUMS引起的大鼠海馬內(nèi)NeuN表達(dá)減少、逆轉(zhuǎn)了腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)和神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)及其受體TrkB和TrkA表達(dá)的下降,并且激活了受體下游PI3K/Akt/CREB通路。說(shuō)明小柴胡湯抗抑郁作用可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、激活神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體下游通路、保護(hù)神經(jīng)元功能有關(guān)。最后本文采用C57BL/6小鼠斷乳孤養(yǎng)模型對(duì)小柴胡湯的抗抑郁作用及與雌、孕激素調(diào)節(jié)的關(guān)系進(jìn)行考察,發(fā)現(xiàn)小柴胡湯可顯著逆轉(zhuǎn)孤養(yǎng)引起的行為絕望狀態(tài)時(shí)間的延長(zhǎng),也顯著抑制孤養(yǎng)誘導(dǎo)的小鼠自主活動(dòng)的增多和攻擊行為加劇等焦慮樣行為。并且小柴胡湯對(duì)孤養(yǎng)誘導(dǎo)的小鼠腦內(nèi)雌二醇和孕酮的降低具有顯著升高作用,同時(shí)顯著激活雌二醇和孕酮受體下游ERK和CREB通路的相關(guān)蛋白,說(shuō)明小柴胡湯對(duì)小鼠孤養(yǎng)模型的抗抑郁作用可能與調(diào)節(jié)腦內(nèi)雌、孕激素和受體下游通路有關(guān)。綜上,本研究發(fā)現(xiàn)小柴胡湯對(duì)多種因素所致抑郁癥模型的抑郁行為均有改善作用,作用機(jī)制可能與維持各類神經(jīng)遞質(zhì)的穩(wěn)態(tài)、增強(qiáng)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)、調(diào)節(jié)雌、孕激素及其下游信號(hào)通路、保護(hù)神經(jīng)元有關(guān)。本文揭示了小柴胡湯抗抑郁作用的可能機(jī)制,為進(jìn)一步闡明其抗抑郁作用的靶點(diǎn)研究奠定了基礎(chǔ),也為研發(fā)以小柴胡湯為基礎(chǔ)的治療抑郁癥的中藥復(fù)方新藥提供了科學(xué)依據(jù)。 

前言

1．抑郁癥概述
迄今為止，關(guān)于抑郁癥的病因并沒(méi)有確切的解釋，但近些年研究表明抑郁癥的發(fā)生受神經(jīng)生化、神經(jīng)再生、神經(jīng)內(nèi)分泌和社會(huì)環(huán)境、遺傳和藥物誘發(fā)諸多因素的影響。隨著現(xiàn)代社會(huì)的高速發(fā)展，競(jìng)爭(zhēng)日益激烈，人們長(zhǎng)時(shí)間的處于高壓力，快節(jié)奏的生活狀態(tài)下，伴隨而來(lái)的長(zhǎng)時(shí)間處于焦慮不安中都會(huì)促使抑郁癥發(fā)病，因此，社會(huì)環(huán)境因素是抑郁癥誘發(fā)的一個(gè)不可忽略的因素，長(zhǎng)期生活在離異家庭或者單親家庭的兒童患抑郁癥的幾率偏高，充滿家庭暴力的家庭也極其容易導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生。

2.抑郁癥的發(fā)病機(jī)制
抑郁癥的發(fā)病機(jī)制到目前為止還沒(méi)有徹底研究清楚，諸多學(xué)者提出了幾種假說(shuō)，主要包括單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說(shuō)、內(nèi)分泌假說(shuō)和神經(jīng)可塑性假說(shuō)等。這些假說(shuō)能夠部分解釋抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，但都有其局限性。下面對(duì)抑郁癥主要的幾種發(fā)病機(jī)制進(jìn)行簡(jiǎn)述。
近年來(lái)認(rèn)為，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化是抑郁癥發(fā)病的基礎(chǔ)。其中抑郁癥發(fā)病的生物學(xué)機(jī)理中，中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)功能棄亂假說(shuō)己經(jīng)成為最重要的假說(shuō)，被大部分學(xué)者所認(rèn)同。單胺類遞質(zhì)系統(tǒng)，主要包括輕色胺能神經(jīng)系統(tǒng)、多巴胺能神經(jīng)系統(tǒng)和去甲腎上腺素能神經(jīng)。單胺假說(shuō)認(rèn)為抑郁癥是腦中單胺能神經(jīng)元功能不足，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)減少而多數(shù)抗抑郁藥是通過(guò)升高突觸間隙單胺遞質(zhì)的水平發(fā)揮抗抑郁作用的。其中，經(jīng)色胺系統(tǒng)功能素亂和神經(jīng)遞質(zhì)的減少是導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)病機(jī)制之一。精神活動(dòng)同時(shí)受多巴胺能神經(jīng)元的調(diào)節(jié)，中腦邊緣皮質(zhì)系統(tǒng)在精神活動(dòng)和情緒表達(dá)中起到十分重要的作用。近些年大量的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了多巴胺假說(shuō)，其中，研究在獲得性無(wú)助抑郁癥動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的尾狀核及伏隔核的耗盡，當(dāng)給予動(dòng)物多巴胺受體激動(dòng)劑后，耗盡的行為學(xué)狀況得到改善。
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第一章小柴胡湯在行為絕望模型和藥物誘發(fā)模型中的抗抑郁作用研究

1.1前言
藥物誘發(fā)模型是另一類對(duì)抗抑郁作用藥效進(jìn)行初步蹄選的模型，其特點(diǎn)不僅可以在行為學(xué)上快速評(píng)價(jià)藥效，還可以在藥效評(píng)價(jià)的同時(shí)，根據(jù)選用模型的不同推斷出藥物抗抑郁作用的可能機(jī)制。這類模型包括利血平誘導(dǎo)小鼠體溫降低和眼瞼下垂模型、誘導(dǎo)的小鼠甩頭模型、阿撲嗎啡拮抗模型、小鼠育亨賓增強(qiáng)模型和苯丙氣戒斷模型等。多年前就己經(jīng)根據(jù)抑郁癥患者的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)耗竭的現(xiàn)象提出了抑郁發(fā)病的單胺假說(shuō)，患者腦內(nèi)的輕色胺的含量降低也是公認(rèn)事實(shí)。而利血平誘導(dǎo)小鼠體溫降低和眼險(xiǎn)下垂模型及輕色氨酸誘導(dǎo)的小鼠甩頭模型是最常用的評(píng)價(jià)抗抑郁藥物單胺機(jī)制的模型。利血平是一種單胺遞質(zhì)耗竭劑，它可以耗竭突觸小泡內(nèi)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)以及代謝物。

1.2實(shí)驗(yàn)材料
小柴胡湯在行為絕望模型中抗抑郁作用藥效初蹄動(dòng)物的蹄選將小鼠放入自主活動(dòng)儀內(nèi)，記錄內(nèi)的活動(dòng)次數(shù)，內(nèi)自主活動(dòng)次數(shù)在次的小鼠為合格鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其余小鼠副除不用。給藥劑量的選擇依據(jù)小鼠行為絕望模型進(jìn)行抗抑郁作用藥效的初蹄，選取臨床等效量為中劑量，上下各取兩個(gè)三倍的劑量共五個(gè)劑量，和進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組及給藥如圖所示，小鼠共計(jì)只，每部分只。每部分小鼠隨機(jī)分為組，每組只。空白對(duì)照（同體積蒸館水）組、陽(yáng)性對(duì)照阿米替林組、小柴胡湯，各組每天灌胃給藥次。第一部分共給藥天，其中第天進(jìn)行，第天進(jìn)行第二部分共給藥天，第天進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)，第天進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)；第三部分共給藥天，第天進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)，第天進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。

第三章小柴胡湯對(duì)大鼠慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和應(yīng)激模型的保護(hù)作用及可能機(jī)制.................49
3.1前言......49
3.2實(shí)驗(yàn)材料............................51
第四章小柴胡湯對(duì)小鼠孤養(yǎng)模型的保護(hù)作用及對(duì)腦內(nèi)雌二醇和孕酮的調(diào)節(jié)作用....................71
4.1前言....................71
4.2實(shí)驗(yàn)材料..........................72
全文結(jié)論...................84

第四章小柴胡湯對(duì)小鼠孤養(yǎng)模型的保護(hù)作用及對(duì)腦內(nèi)雌二醇和孕酮的調(diào)節(jié)作用

4.1前言
雌性激素主要分為兩類，即雌激素和孕激素，雌激素主要代表為雌二醇，孕激素是由卵巢的黃體細(xì)胞分泌，主要以孕酮為主。臨床研宄表明，無(wú)論男性還是女性抑郁癥患者血清雌二醇水平均降低，治療前雌二醇水平與、分?jǐn)?shù)呈負(fù)相關(guān)，與減分率呈正相關(guān)，即雌二醇與抑郁癥的病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，與抗抑郁療效呈正相關(guān)。提示血清雌二醇水平有可能成為預(yù)測(cè)抑郁癥患者療效的一個(gè)指標(biāo)。另外，是線粒體內(nèi)合成的神經(jīng)類固醇母體，可進(jìn)一步代謝轉(zhuǎn)化成、等激動(dòng)性神經(jīng)類固醇。文獻(xiàn)報(bào)道，抑郁患者腦脊液中含量低于正常人，在治療重癥抑郁患者的臨床研宄中發(fā)現(xiàn)，給予酮康挫治療的患者血清含量顯著增加，同時(shí)抑郁癥狀緩解。目前對(duì)抑郁癥患者體內(nèi)含量變化的報(bào)道并不一致，但大量研宄證實(shí)，的代謝產(chǎn)物是強(qiáng)效的變構(gòu)調(diào)節(jié)因子，具有明確的抗抑郁、抗焦慮作用。

4.2實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)前一天，把1只空白鼠作為入侵鼠放入孤養(yǎng)鼠的飼養(yǎng)籠內(nèi)，孤養(yǎng)小鼠會(huì)對(duì)“入侵鼠”進(jìn)行攻擊，行為表現(xiàn)為：在籠底部襲擊空白鼠的尾巴、尖叫并撕咬。觀察內(nèi)孤養(yǎng)鼠對(duì)群養(yǎng)鼠的攻擊行為，記錄攻擊行為總時(shí)間。給藥前一天和第4周結(jié)束，即造模第10周，為避免多次進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)使小鼠消耗體力過(guò)大而影響其他指標(biāo)的檢測(cè)，每組取一半的小鼠進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)（另一半的小鼠進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)），具體方法見(jiàn)第一章。
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全文結(jié)論

小柴胡湯對(duì)行為絕望模型、藥物誘發(fā)模型、大鼠模型和小鼠孤養(yǎng)模型均具有顯著抗抑郁作用。小柴胡湯抗抑郁作用與對(duì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和以及和功能的調(diào)節(jié)有關(guān)，并且與對(duì)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)有關(guān)。小柴胡湯抗抑郁作用與對(duì)血清皮質(zhì)酮的調(diào)節(jié)有關(guān)，小柴胡湯抗抑郁作用與增加神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子下游通路的活化，進(jìn)而保護(hù)神經(jīng)元，增強(qiáng)神經(jīng)元的功能，維持神經(jīng)遞質(zhì)合成和分泌的穩(wěn)態(tài)等有關(guān)。小柴胡湯抗抑郁作用與增加腦內(nèi)雌二醇和孕酮含量，激活雌二醇及孕酮受體下游通路有關(guān)。
首次在多種抑郁動(dòng)物模型上確證了小柴胡湯的抗抑郁作用、首次發(fā)現(xiàn)小柴胡湯對(duì)血清皮質(zhì)酮水平和腦內(nèi)、的含量具有調(diào)節(jié)作用、對(duì)腦內(nèi)和的表達(dá)具有增加作用并對(duì)其受體下游通路具有激活作用。首次發(fā)現(xiàn)孤養(yǎng)可以降低小鼠腦內(nèi)雌二醇、孕酮表達(dá)水平及其受體下游通路各蛋白活化水平，小柴胡湯可顯著逆轉(zhuǎn)孤養(yǎng)誘導(dǎo)的該兩種雌性激素及其受體活化水平.

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