【摘要】 有機(jī)磷類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥以及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥，都因其高效、低毒、低殘留的特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、林業(yè)和衛(wèi)生等行業(yè)。這三類農(nóng)藥都能影響動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)的傳導(dǎo)，進(jìn)而產(chǎn)生相應(yīng)的神經(jīng)毒性作用，因此可以統(tǒng)稱為神經(jīng)抑制類農(nóng)藥。目前許多研究發(fā)現(xiàn)，有機(jī)磷農(nóng)藥主要是通過抑制乙酰膽堿酯酶（Acetylcholinesterase, AChE）活性而發(fā)揮毒性作用的，此外有機(jī)磷農(nóng)藥還可能直接抑制毒蕈堿型乙酰膽堿受體（Muscarinic acetylcholinereceptor, mAChR）和煙堿型乙酰膽堿受體（Nicotinic acetylcholine receptor, nAChR）的活性；氨基甲酸酯類農(nóng)藥具有與有機(jī)磷類農(nóng)藥類似的抑制作用，也是主要抑制AChE的活性；擬除蟲菊酯類農(nóng)藥則主要是通過抑制動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞膜上的Na+通道，使神經(jīng)系統(tǒng)的傳導(dǎo)失常，從而產(chǎn)生神經(jīng)毒害作用。斑馬魚(Danio rerio)具有個(gè)體小、繁殖力強(qiáng)、易操作、對(duì)毒物反應(yīng)敏感等特點(diǎn)，是研究脊椎動(dòng)物毒性作用的理想生物模型。本文選用了有機(jī)磷類農(nóng)藥馬拉硫磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥滅多威以及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥溴氰菊酯作為實(shí)驗(yàn)藥物，以斑馬魚成體為受試生物，根據(jù)三種農(nóng)藥對(duì)斑馬魚的24h半數(shù)死亡濃度（24h-LC50），設(shè)定0.5TU、1TU和2TU三個(gè)濃度組，測(cè)定不同農(nóng)藥不同濃度下，mAChR和nAChR的活性隨時(shí)間的變化趨勢(shì)，以分析斑馬魚體內(nèi)這兩種受體活性的變化規(guī)律。為進(jìn)一步探討神經(jīng)抑制類農(nóng)藥對(duì)膽堿能系統(tǒng)的作用機(jī)制和膽堿能受體活性的影響提供數(shù)據(jù)支持。研究結(jié)果表明：1.24h急性毒性實(shí)驗(yàn)表明：馬拉硫磷、滅多威和溴氰菊酯對(duì)斑馬魚的24h-LC50分別9.48μg/L、2299.23μg/L、5.32μg/L，馬拉硫磷和溴氰菊酯對(duì)于斑馬魚屬于劇毒性毒物，而滅多威屬于中等毒性毒物。斑馬魚的死亡率與這三種農(nóng)藥的濃度均呈正相關(guān)，具有較高的相關(guān)系數(shù)，且具有明顯的劑效關(guān)系。在行為上，斑馬魚在受到不同藥物的刺激時(shí)，均會(huì)表現(xiàn)出明顯的行為變化，這是斑馬魚對(duì)毒物環(huán)境的調(diào)整和適應(yīng)。2.馬拉硫磷、滅多威和溴氰菊酯對(duì)斑馬魚的毒蕈堿型乙酰膽堿受體有明顯地抑制效果。其中，滅多威對(duì)mAChR的抑制作用最大；而差異性實(shí)驗(yàn)表明，在低濃度（0.5TU）下，溴氰菊酯的抑制作用最顯著。隨著暴露時(shí)間的增加，各濃度組的mAChR活性均出現(xiàn)降低的現(xiàn)象，且基本上符合隨著暴露濃度的增加，抑制效果越明顯的趨勢(shì)。在暴露過程中，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)活性回升的現(xiàn)象，可能與斑馬魚對(duì)毒物環(huán)境的適應(yīng)有關(guān)。3.馬拉硫磷、滅多威和溴氰菊酯對(duì)斑馬魚的煙堿型乙酰膽堿受體存在一定的抑制作用，但總體來說，抑制效果不如對(duì)mAChR明顯。溴氰菊酯對(duì)nAChR活性的抑制效果最明顯，達(dá)到39.88%。而差異性分析表明，僅馬拉硫磷在0.5TU濃度下存在顯著性地抑制效果。nAChR的活性隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而降低的現(xiàn)象并不明顯，大部分濃度下，在暴露前期就存在抑制效果，且一直保持在一定的范圍內(nèi)，說明農(nóng)藥對(duì)nAChR活性的影響有一定的限制作用。在某些時(shí)間也會(huì)出現(xiàn)nAChR活性恢復(fù)的現(xiàn)象，可能與斑馬魚對(duì)農(nóng)藥代謝的適應(yīng)有關(guān)。4. mAChR和nAChR的活性隨時(shí)間的變化趨勢(shì)與生物逐級(jí)行為模型(Stepwise stressmodel, SSM)有一定的相似性。多數(shù)暴露組濃度存在暴露前期活性增強(qiáng)，之后活性降低的現(xiàn)象；而且出現(xiàn)活性降低過程中活性回復(fù)的階段。綜上所述，三種農(nóng)藥對(duì)mAChR和nAChR均存在一定的抑制作用，其中對(duì)mAChR活性的抑制效果明顯，這可能與農(nóng)藥的制度機(jī)制有關(guān)。在低藥物濃度下，mAChR的活性對(duì)溴氰菊酯較為敏感，而nAChR的活性對(duì)馬拉硫磷較為敏感�？傮w而言，膽堿能受體的抑制作用與農(nóng)藥的暴露濃度和暴露時(shí)間均存在正相關(guān)。在一定時(shí)間存在活性恢復(fù)的現(xiàn)象，這應(yīng)該與斑馬魚對(duì)藥物的適應(yīng)有關(guān)。