【摘要】 梅毒是由梅毒螺旋體(Treponema pallidum, Tp)引起的嚴(yán)重危害人類健康的性傳播性疾病。Tp可以在疾病的任何階段入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng),引起神經(jīng)梅毒。由于神經(jīng)梅毒臨床癥狀復(fù)雜,誤診與漏診率極高,早期診斷非常重要。目前,神經(jīng)梅毒的診斷主要是依靠患者的病史、臨床癥狀與體征、血液和腦脊液(CSF)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查。本課題分析了52例HIV陰性的神經(jīng)梅毒患者外周血淋巴細(xì)胞亞群及CSF常規(guī)、生化、免疫實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的變化,通過(guò)兔感染模型,分析經(jīng)Tp感染后,新西蘭兔CSF RPR、TPPA、常規(guī)及生化指標(biāo)隨感染時(shí)間不同的變化情況。探討神經(jīng)梅毒患者細(xì)胞免疫和體液免疫相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對(duì)臨床的應(yīng)用價(jià)值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CD3+T淋巴細(xì)胞與CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞在炎癥反應(yīng)最劇烈的早期神經(jīng)梅毒患者體內(nèi)含量最低,與無(wú)癥狀和晚期神經(jīng)梅毒患者相比,早期神經(jīng)梅毒患者的CD3+CD4+/CD3+CD8+比值差異最大,反映了早期神經(jīng)梅毒患者體內(nèi)存在明顯的細(xì)胞免疫失衡。與正常對(duì)照組相比,神經(jīng)梅毒患者的CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量升高,NK細(xì)胞數(shù)量下降。CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞在不同臨床階段神經(jīng)梅毒患者及健康體檢者間的含量變化均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。CSF白細(xì)胞(WBC)、CSF蛋白、CSF自蛋白、白蛋白商、CSFIgG、CSF IgA、IgG指數(shù)和IgA指數(shù)的升高,CSF乳酸脫氫酶(LDH)的降低都與神經(jīng)梅毒的進(jìn)展密切相關(guān)。與Nichols標(biāo)準(zhǔn)株相比,臨床分離的野生株感染新西蘭兔引起的免疫反應(yīng)較弱。臨床不同來(lái)源的Tp野生株感染新西蘭兔,導(dǎo)致新西蘭兔的CSF WBC、CSF蛋白、CSF白蛋白以及CSF LDH隨病程的進(jìn)展,含量升高到一定水平又逐漸下降,這與不同臨床階段神經(jīng)梅毒患者CSF相應(yīng)指標(biāo)表現(xiàn)類似。血液和腦脊液的相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)于神經(jīng)梅毒的診斷和病情監(jiān)測(cè)具有重要的作用。
 
【關(guān)鍵詞】 神經(jīng)梅毒； 細(xì)胞免疫； 腦脊液；

第一章緒論

1.神經(jīng)梅毒的臨床與診斷
近10年來(lái)，中國(guó)的梅毒發(fā)病率逐年上升m。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心的官方數(shù)據(jù)顯示2013年我國(guó)梅毒的發(fā)病數(shù)為437686例，比2012年同期增長(zhǎng)6.73%。報(bào)告發(fā)病數(shù)僅次于病毒性肝炎和肺結(jié)核居第三位，居于性傳播疾病首位（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心梅毒疫情已成為我國(guó)乃至全球高度關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題【2-4】。2010年，衛(wèi)生部制定《中國(guó)預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃(2010-2020年)》以遏制梅毒的蔓延。由于侵入神經(jīng)系統(tǒng)可表現(xiàn)出各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病相似的臨床癥狀，以至被稱為“偉大的模仿者”或“偉大的魔術(shù)師”，因此臨床上對(duì)神經(jīng)梅毒的鑒別診斷較困難。比如臨床中常見(jiàn)的神經(jīng)梅毒所導(dǎo)致的麻搏性癡呆，其臨床表現(xiàn)類似于精神病患者的精神分裂癥，常規(guī)抗精神失常類藥物無(wú)法控制這類患者的病情，類似的誤診導(dǎo)致延誤患者的最佳治療時(shí)機(jī)。早期神經(jīng)梅毒可以產(chǎn)生神經(jīng)功能障礙，晚期則產(chǎn)生不可逆的器質(zhì)性損害和嚴(yán)重的功能障礙，甚至危及生命。

2.神經(jīng)梅毒與免疫
人類對(duì)無(wú)先天或自然免疫，感染后，機(jī)體逐漸產(chǎn)生免疫力，包括體液免疫與細(xì)胞免疫。因此，梅毒的免疫是感染性免疫，即僅當(dāng)機(jī)體有感染時(shí)，才有免疫力。硬下疳發(fā)生后1-3周，機(jī)體開(kāi)始產(chǎn)生免疫反應(yīng)，到二期梅毒時(shí)，機(jī)體免疫力達(dá)到高峰，以后逐漸消退。的免疫僅僅是不完全免疫，大多數(shù)患者不能完全清除部分能夠逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別，侵入神經(jīng)系統(tǒng)導(dǎo)致神經(jīng)梅毒。
NK細(xì)胞是一類不需要特異性抗體參與或無(wú)需靶細(xì)胞上的MHC I類或MHC II類分子表達(dá)即可直接殺傷靶細(xì)胞的細(xì)胞。T細(xì)胞啟動(dòng)之前就與NK細(xì)胞一起構(gòu)成細(xì)胞免疫系統(tǒng)的第一道防線，起著免疫監(jiān)視的作用。NK細(xì)胞除本身可直接殺傷病原微生物外，尚可通過(guò)分泌IFN-y刺激巨噬細(xì)胞的吞噬作用，并進(jìn)而刺激巨噬細(xì)胞分泌IL-12增加。IL-12是刺激CD4+T細(xì)胞向Thl方向轉(zhuǎn)化的重要細(xì)胞因子，NK細(xì)胞通過(guò)分泌IFN-Y維持Thl的優(yōu)勢(shì)狀態(tài)。NK細(xì)胞的存在決定著殺傷性T細(xì)胞（Cytotoxic!" lymphocyte，CTL)前體細(xì)胞向成熟CTL的分化并且控制著記憶細(xì)胞的形成。多位學(xué)者認(rèn)為，NK細(xì)胞在清除7>方面起著重要作用，NK細(xì)胞的下降下調(diào)了機(jī)體對(duì)7>的細(xì)胞免疫能力，也從另一個(gè)方面解釋了未治療梅毒患者體內(nèi)的Tp為何可以逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)視。
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第二章研究對(duì)象、材料和方法

1.研究對(duì)象
研究對(duì)象來(lái)自于2012年3月至2014年3月期間某附屬中山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院患者，并且滿足以下條件：(1)神經(jīng)梅毒組：a.患者臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢査被診斷為神經(jīng)梅毒；b. HIV抗體試驗(yàn)呈陰性；c.無(wú)其它己知的引起神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征的原因；d.無(wú)自身免疫性疾病，腫瘤以及無(wú)其它疾病引起的炎癥反應(yīng)�；颊弑粍澐譃槿�組：無(wú)癥狀神經(jīng)梅毒組（17例），早期神經(jīng)梅毒組（包括腦膜神經(jīng)梅毒和腦膜腦血管神經(jīng)梅毒，共23例），晚期神經(jīng)梅毒組（包括麻痹性癡呆和脊髓癆，共12例）（共52例，男/女=37/15，平均年齡51.6歲）。(2)健康對(duì)照組：同一時(shí)期醫(yī)院的健康體檢者（50例，男/女=36/14，平均年齡54.2歲）。(3)疾病對(duì)照組：非神經(jīng)梅毒的梅毒患者（50例，男/女=35/15,平均年齡53.1歲）。

2.實(shí)驗(yàn)材料
全自動(dòng)血液分析儀XE5000 日本Sysmex公司
全自動(dòng)Roche-Hitachi Modular P800生化分析儀瑞士 Roche公司
流式細(xì)胞儀FACS Canto II 美國(guó)Becton Dickinson公司
特定蛋白分析儀 美國(guó)西門子公司

第三章神經(jīng)梅毒患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群分析.......... 18
1. 前言 ........18
2.研究對(duì)象 .......18
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 .........19
第四章神經(jīng)梅毒患者及兔感染模型的腦脊液指標(biāo)分析 .........24
1.前言......... 24
2.研究對(duì)象 .........24
2.1患者 ..........24 
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果........ 25
3.1神經(jīng)梅毒患者的腦脊液常規(guī)和生化指標(biāo)分析.......... 25
3.2神經(jīng)梅毒患者的血清及腦脊液免疫球蛋白分析...... 26

第四章神經(jīng)梅毒患者及兔感染模型的腦脊液指標(biāo)分析

1.前言
我們收集了 2012年3月至2014年3月在廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的患者52例，對(duì)其腦脊液常規(guī)、生化及免疫指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)研宄。此外，我們選取實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組各12只雄性新西蘭兔，成功建立兔感染模型，并將其隨機(jī)分為4組，每組3只，在不同的時(shí)間段（7天，17天，25天，39天）抽取腦脊液進(jìn)行相關(guān)的常規(guī)和生化指標(biāo)分析。探討神經(jīng)梅毒患者的腦脊液指標(biāo)在神經(jīng)梅毒的診斷價(jià)值及腦脊液指標(biāo)異常變化與病程的關(guān)系。

2.研究對(duì)象
收集2012年3月到20〗4年3月期間在廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科初次就診的神經(jīng)梅毒患者，滿足條件的52例HIV陰性的神經(jīng)梅毒患者納入本次研宄，同一時(shí)期的神經(jīng)內(nèi)科住院進(jìn)行腦脊液檢查的患者（50例）作為對(duì)照組（見(jiàn)表5)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組各選用12只7抗原血清學(xué)檢測(cè)陰性的雄性新西蘭兔作為研宄對(duì)象。將新西蘭兔飼養(yǎng)于室溫（15°C-18°C)的環(huán)境中，用不含抗生素的飼料與水喂養(yǎng)新西蘭兔。將實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的新西蘭兔各隨機(jī)分為四組，每組3只。感染不同的7后在相應(yīng)的時(shí)間段（7天，17天，25天，39天）麻醉新西蘭兔，抽取腦脊液進(jìn)行相關(guān)的常規(guī)和生化指標(biāo)分析。這項(xiàng)研宄協(xié)議遵循1975年的《赫爾辛基宣言》的倫理指南，同時(shí)獲得廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。
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結(jié)論

1.與其它組相比，CD3+與CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞在早期神經(jīng)梅毒患者體內(nèi)含量最低，與無(wú)癥狀和晚期神經(jīng)梅毒患者相比，CD3+CD4+/CD3+CD8+比值在早期神經(jīng)梅毒患者的差異最大，反映了早期神經(jīng)梅毒患者體內(nèi)存在明顯的細(xì)胞免疫失衡。2.與正常對(duì)照組相比，神經(jīng)梅毒患者的CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量升高，NK細(xì)胞數(shù)量下降。CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞在不同臨床階段神經(jīng)梅毒患者及健康體檢者間的含量變化均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.CSF白細(xì)胞、CSF蛋白、CSF白蛋白、白蛋白商、CSF IgG、CSF IgA、IgG指數(shù)和IgA指數(shù)的升高，CSF乳酸脫氫酶（LDH)的降低都與神經(jīng)梅毒的進(jìn)展密切相關(guān)。4.與Nicho丨s標(biāo)準(zhǔn)株相比，臨床分離的野生株感染新西蘭兔引起的免疫反應(yīng)較弱。5.臨床不同來(lái)源的7>野生株感染新西蘭兔，導(dǎo)致新西蘭兔的CSF WBC、CSF蛋白、CSF白蛋白及CSFLDH隨病程的進(jìn)展，含量升高到一定水平又逐漸下降，這與不同臨床階段神經(jīng)梅毒患者CSF相應(yīng)指標(biāo)表現(xiàn)類似。

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