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過表達(dá)pyrP基因與NupC基因?qū)Υ竽c桿菌發(fā)酵分泌胞苷的影響

發(fā)布時(shí)間:2024-06-16 07:38
  胞嘧啶核苷,也稱為胞苷,是核苷類保健食品與藥物重要的原料,市場需求量很大。胞苷主要通過微生物發(fā)酵方法獲得,但現(xiàn)有菌株的胞苷發(fā)酵水平不高,受到多種因素影響。優(yōu)化菌株細(xì)胞內(nèi)胞苷的合成代謝方式及提高胞苷分泌效率是提高發(fā)酵單位的主要途徑。胞苷可能是通過多種轉(zhuǎn)運(yùn)方式進(jìn)行跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的,尿嘧啶通透酶(pyrP,EC3.1.3.104,由pyrP基因編碼,分子量48KDa)和核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NupC,EC2.3.1.256,由NupC基因編碼,分子量43 KDa)可能與胞苷分泌過程有關(guān)。本研究通過構(gòu)建尿嘧啶通透酶和核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC過表達(dá)體系,分析這兩個(gè)基因的過表達(dá)對菌體細(xì)胞生長與胞苷發(fā)酵的影響,研究尿嘧啶通透酶和核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在胞苷分泌過程的作用,從而不斷提高菌體發(fā)酵胞苷的產(chǎn)率。具體研究內(nèi)容如下:1、異源pyP基因過表達(dá)載體構(gòu)建及其對胞苷發(fā)酵的影響。從解淀粉芽孢桿菌BG-09基因組DNA上PCR擴(kuò)增pyrP基因,并與pSTV28載體進(jìn)行連接構(gòu)建質(zhì)粒載體pSTV28-pyrP。采用化學(xué)轉(zhuǎn)化法將其轉(zhuǎn)入Escherichia coliBG-08中,得到重組菌E.coliBG-08P。使用0.5 mmol/L ...

【文章頁數(shù)】:65 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

圖1-2胞苷在大腸桿菌中的生物合成途徑[7]??Figure?1-2?Biosynthesis?of?Cytidine?in?Escherichia?coli??

圖1-2胞苷在大腸桿菌中的生物合成途徑[7]??Figure?1-2?Biosynthesis?of?Cytidine?in?Escherichia?coli??

尿嘧啶通透酶(;7>rP,?EC?3.1.3.104,由砂rP基因編碼,分子量48KDa),解淀粉芽孢??桿菌中尿嘧啶通透酶基因位于嘧啶操縱子的前端,尿嘧啶通透酶和嘧啶的轉(zhuǎn)運(yùn)關(guān)系密??切,添加其表達(dá)劑量將在胞嘧啶的合成中起重要作用。操縱子含有10個(gè)基因,如圖1-3所??不,pyr....


圖2-14胞苷標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖??Figure?2-14?HPLC?ofCytidine?standard??

圖2-14胞苷標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖??Figure?2-14?HPLC?ofCytidine?standard??

2.2.9?pSTV28質(zhì)粒的提取??挑取單克隆提取質(zhì)粒,使用TIANGEN質(zhì)粒小提試劑盒(DP103)試劑盒法提。穑樱裕郑玻??質(zhì)粒,提取步驟如圖2-12。使用前先在漂洗液PW中加入無水乙醇,將500?mL平衡液BL??加入吸附柱CP3中(吸附柱放入收集管中),以12000?....


圖2-15胞普高效液相色譜圈

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圖2-16£.a?"BG-08生長曲線??Figure?2-16?Growth?Curve?of?E.coli?BG-08??-.-

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本文編號(hào):3995089

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