雷竹FT基因的生物學(xué)功能分析
發(fā)布時(shí)間：2021-03-19 09:35
FT(FLOWEREING LOCUS T)基因家族進(jìn)化上高度保守,其編碼的磷脂酞乙醇胺結(jié)合蛋白在高等植物成花轉(zhuǎn)變過程中有很重要的作用。本課題組從雷竹中克隆出了6個PvFT基因的cDNA序列,本研究通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將PvFT2-3,PvFT2-7,PvFT5轉(zhuǎn)到擬南芥中,并對其生物學(xué)功能進(jìn)行初步分析。主要結(jié)果如下:1、構(gòu)建了6個PvFT基因的過表達(dá)載體pCAMBIA 1301-PvFT2,pCAMBIA 1301-PvFT3,pCAMBIA 1301-PvFT4,pCAMBIA 1301-PvFT5,pCAMBIA 1301-PvFT6,分別轉(zhuǎn)入野生型擬南芥和ft突變體中,獲得了轉(zhuǎn)基因的株系。2、表型觀察結(jié)果顯示,過表達(dá)PvFT1的T3代擬南芥和ft-1突變體互補(bǔ)的T3代擬南芥在播種后16天開始抽薹,此時(shí)轉(zhuǎn)基因擬南芥的蓮座葉只有4片葉子,且野生型擬南芥尚未抽薹。到了21天,過表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥的苗高3.5cm時(shí),花苞形成,轉(zhuǎn)基因植株開花,此時(shí)野生型擬南芥尚未抽薹開花,有蓮座葉數(shù)6片。待野生型擬南芥的蓮座葉數(shù)達(dá)到12片時(shí)植株才開始開花,表明PvFT1能夠引起植物早花。3、分別轉(zhuǎn)PvFT2基因兩個轉(zhuǎn)錄本的擬南芥表型顯示,與野生型相比,PvFT2-3和PvFT2-7過表達(dá)轉(zhuǎn)基因T2代擬南芥均可提前開花5天,兩個轉(zhuǎn)基因植株的表型相似。突變體互補(bǔ)結(jié)果顯示,兩個轉(zhuǎn)錄本能促使突變體提前開花,但只能部分互補(bǔ)突變體的表型,35S::PvFT2-7和35S::PvFT2-3均在播種后32天,野生型開花時(shí)間為播種后30天,突變體開花時(shí)間為播種后45天。4、轉(zhuǎn)PvFT5基因的擬南芥表型顯示,與野生型相比,PvFT5過表達(dá)轉(zhuǎn)基因T2代擬南芥均可提前開花7天。突變體互補(bǔ)結(jié)果顯示,該轉(zhuǎn)錄本能促使突變體提前開花,但只能部分互補(bǔ)突變體的表型,35S::PvFT5在播種后30天開花,野生型開花時(shí)間為播種后30天,突變體開花時(shí)間為播種后45天。5、綜上這四個FT基因的轉(zhuǎn)擬南芥的表型分析,我們發(fā)現(xiàn)PvFT1、PvFT2-3、PvFT2-7、PvFT5為誘導(dǎo)性基因,能促使擬南芥提前抽薹和開花等,說明該基因是植物開花的關(guān)鍵調(diào)節(jié)子,但在調(diào)控開花時(shí)間方面存在差異。且相比較野生型擬南芥,植株相對瘦弱矮小,葉片葉綠素含量相對較低,開花數(shù)量和結(jié)實(shí)率都相對略低。
【學(xué)位授予單位】：浙江農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S795
本文編號：2302497
【學(xué)位授予單位】：浙江農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S795
文章目錄
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 植物FT基因家族的簡介
1.1.1 FT基因的結(jié)構(gòu)特征
1.2 FT基因及其表達(dá)調(diào)控
1.2.1 FT基因的概述
1.3 FT基因在植物發(fā)育調(diào)控中的多功能作用
1.3.1 FT-like基因在成花轉(zhuǎn)變過程中的功能
1.3.2 FT-like基因在地下組織發(fā)育過程中的功能
1.3.3 FT-like基因的其他功能
1.4 竹類植物開花相關(guān)基因的研究進(jìn)展
1.5 本研究的目的意義
第二章 材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.1 DNA的提取
2.2.2 雷竹總RNA的提取
2.2.3 c DNA的反轉(zhuǎn)錄
2.2.4 引物的設(shè)計(jì)
2.2.5 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的擴(kuò)增
2.2.6 目的條帶的回收
2.2.7 目的片段與載體的連接
2.2.8 轉(zhuǎn)化
2.2.8.1 大腸桿菌的轉(zhuǎn)化
2.2.8.2 農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
2.2.9 菌檢與測序
2.2.10 感受態(tài)的制備
2.2.10.1 大腸桿菌DH5α 感受態(tài)的制備
2.2.10.2 農(nóng)桿菌（GV3101）感受態(tài)細(xì)胞的制作
2.2.11 質(zhì)粒的提取
2.2.12 目的基因片段與表達(dá)載體質(zhì)粒的酶切
2.2.13 轉(zhuǎn)基因功能驗(yàn)證
2.2.13.1 植物過表達(dá)載體的構(gòu)建和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
2.2.13.2 擬南芥的種植：
2.2.13.3 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化：
2.2.13.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選和鑒定
2.2.13.5 GUS染色
2.2.13.6 擬南芥葉綠素的測定
2.2.13.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
2.2.13.8 轉(zhuǎn)基因擬南芥種子的獲得：
第三章 結(jié)果與分析
3.1 雷竹幼葉RNA的提取
3.2 植物表達(dá)載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化
3.2.1 植物表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
3.2.2 表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
3.3 轉(zhuǎn)基因植株的獲得、篩選和鑒定
3.3.1 轉(zhuǎn)基因植株的抗性篩選
3.3.2 轉(zhuǎn)基因植株的PCR驗(yàn)證
3.3.3 轉(zhuǎn)基因植株的GUS報(bào)告基因檢測
3.4 雷竹FT基因的功能驗(yàn)證
3.4.1 Pv FT1轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型觀察與分析
3.4.1.1 Pv FT1基因過表達(dá)轉(zhuǎn)化野生型擬南芥
3.4.2 Pv FT2轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型觀察與分析
3.4.2.1 Pv FT2過表達(dá)表型分析
3.4.2.2 Pv FT2互補(bǔ)表型分析
3.4.3 Pv FT5轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型觀察與分析
3.4.3.1 Pv FT5過表達(dá)表型分析
3.4.3.2 Pv FT5互補(bǔ)表型分析
3.4.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型分析
3.4.5 轉(zhuǎn)基因植株葉綠素含量的比較
第四章 討論與結(jié)論
4.1 討論
4.2 結(jié)論
第五章 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
個人簡歷
致謝
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號：2302497
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