釀酒酵母不僅細(xì)胞內(nèi)富含各種活性物質(zhì),而且其本身也可以作為工程菌產(chǎn)生活性物質(zhì)。但是酵母具有很厚的細(xì)胞壁,細(xì)胞內(nèi)的這些活性物質(zhì)都被其包圍著,為了更好地利用細(xì)胞內(nèi)的這些物質(zhì)資源,研究有效的破壁方法特別重要。關(guān)于破碎酵母的細(xì)胞壁的方法多集中于化學(xué)、物理和生物破壁等,但是它們都存在各種各樣的缺點(diǎn),如化學(xué)破壁不僅會使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)受到破壞,同時(shí)還會對環(huán)境產(chǎn)生惡劣的影響;物理破壁時(shí)會產(chǎn)生很大的噪聲污染;生物破壁時(shí)所需費(fèi)用相對較高,而且單一使用呈現(xiàn)的結(jié)果并不是很好。目前,利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對酵母的基因進(jìn)行編輯取得了非常顯著的成果,可以用于酵母基因組的單個(gè)或多個(gè)基因的突變以及染色體的大片段缺失和基因插入等。因此,在本實(shí)驗(yàn)中,采用CRISPR/Cas9系統(tǒng),探究目的基因在特定條件下對酵母細(xì)胞壁穩(wěn)定性的影響。本實(shí)驗(yàn)對釀酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因進(jìn)行編輯,取得了如下結(jié)果:1.利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對釀酒酵母2.558菌株基因組中的SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因進(jìn)行疊加編輯,獲得突變株2.558-IV。2.探究溫度對釀酒酵母突變株2.558-IV細(xì)胞壁穩(wěn)定性...

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1以2.558為出發(fā)菌進(jìn)行SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因編輯的路線圖

第二章釀酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4多基因編輯11表2-4所用引物及其序列（續(xù)）Table2-4Primersandsequences引物名稱序列(5`-3`)ROM2RTTGGGAGTAGCATCAGTGGSIT4FCAATAAAGAAATGCCAGGCGSIT....

圖2-2gRNA與Cas9共表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建電泳圖

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文222.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析2.3.1SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA/Cas9共表達(dá)質(zhì)粒的正確構(gòu)建分別將SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA敲除組件和pCRCTG418載體用BsaI進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)過回收后，再以一定的比例....

圖2-3轉(zhuǎn)化子擴(kuò)增電泳圖

第二章釀酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4多基因編輯23都可以轉(zhuǎn)化釀酒酵母。2.3.3陽性轉(zhuǎn)化子的選擇分別進(jìn)行SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA/Cas9共表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化，對平板上長出的菌落和出發(fā)菌分別用plnyzF/R引物進(jìn)行擴(kuò)增驗(yàn)證，出發(fā)菌沒有12....

圖2-5SNF1基因部分序列（突變部位）比對圖

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文24泳檢測結(jié)果如圖2-4所示，產(chǎn)物大小都與預(yù)期相符。序列比對如圖2-5、2-6、2-7、2-8所示。12M535bp614bp560bp34M圖2-4單基因突變株擴(kuò)增電泳圖Figure2-4Amplificationelectrophoretogramofth....

本文編號：3994709