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擬南芥水楊酸代謝突變體的篩選克隆和S5H同源基因的功能分析

發(fā)布時(shí)間:2024-06-12 00:39
  在植物中,水楊酸(SA)作為一種重要的內(nèi)源激素調(diào)控植物的抗病、抗逆、生長(zhǎng)發(fā)育和衰老。其代謝機(jī)理是SA研究的重要內(nèi)容之一。在擬南芥中,SA合成和分解代謝路徑尚未被闡述清楚。為了深入揭示水楊酸代謝的分子機(jī)制及生理功能,本文利用EMS誘變因SA積累而變小的擬南芥雙突變體s3h*s5h,篩選表型恢復(fù)變大的突變體,用正向遺傳學(xué)方法克隆SA代謝相關(guān)基因。同時(shí)通過(guò)生物信息學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)等研究方法研究一個(gè)水楊酸羥基化代謝候選基因At4g10490(DLO2)的生理學(xué)功能。取得的具體研究結(jié)果如下:(1)本文利用一種依賴(lài)于水楊酸突變體表型篩選水楊酸相關(guān)突變體的方法,對(duì)EMS誘變的水楊酸積累的擬南芥雙突變體Col-O s3*s5h進(jìn)行篩選,篩選出表型恢復(fù)變大的突變體,建立表型恢復(fù)突變體庫(kù)。對(duì)己篩選出的突變體進(jìn)行表型、直徑及水楊酸代謝水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。本文己篩選出20個(gè)與水楊酸代謝及葉片衰老相關(guān)的突變體,并根據(jù)其表型及水楊酸代謝水平分為四類(lèi),分別為:Ⅰ表型恢復(fù)變大且葉片晚衰,SA含量降低的突變體;Ⅱ表型恢復(fù)變大且葉片晚衰,SA含量與雙突變體s3h*s5h相似的突變體;Ⅲ表型恢復(fù)變大且葉片早衰,S...

【文章頁(yè)數(shù)】:75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

圖2.2?M2代突變體表型??Fig?2.2?the?phenotype?of?M2?mutants??

圖2.2?M2代突變體表型??Fig?2.2?the?phenotype?of?M2?mutants??

位于SA誘導(dǎo)早衰的信號(hào)通路中,那么該基因突變會(huì)抑制早衰的表型。因此我們??采用甲基磺酸乙脂(EMS)化學(xué)誘變方法,對(duì)葉片嚴(yán)重早衰的擬南芥H/?七5/;雙突變體??進(jìn)行誘變,觀察M2代植株發(fā)育表型(如圖2.2所示),其中葉片變大和(或)抑制早衰??的突變體即為SA相關(guān)突變體。根據(jù)此....


圖2.4葉片變大、晚衰且SA含量降低的突變體的表型分析??A,21天WT、與突變體的表型對(duì)比;B,?21天WT、與突變體的直徑對(duì)比

圖2.4葉片變大、晚衰且SA含量降低的突變體的表型分析??A,21天WT、與突變體的表型對(duì)比;B,?21天WT、與突變體的直徑對(duì)比

??圖2.3.葉片變大和(或)抑制早衰的突變體表型??Fig?2.3?The?phenotype?of?leaf?morphing?and/or?suppressing?premature?aging?mutants??2.2.1葉片變大、晚衰且SA含量降低的突變體??在篩選得到....


圖2.6葉片變大、早衰且SA含量未變的突變體的表型和代謝分析??A,21天與突變體的表型對(duì)比;B,?21天WT、d/ih5A與突變體的直徑對(duì)比;C,??21天WT、■dPd/;與突變體的水楊酸代謝分析對(duì)比

圖2.6葉片變大、早衰且SA含量未變的突變體的表型和代謝分析??A,21天與突變體的表型對(duì)比;B,?21天WT、d/ih5A與突變體的直徑對(duì)比;C,??21天WT、■dPd/;與突變體的水楊酸代謝分析對(duì)比

^?^°°8^§§§§§2§8§§28??—x〇T5—?-r〇C?K5-^.a)h〇CO-P^CD—??圖2.5葉片變大、晚衰且SA含量降低的突變體的代謝分析??Fig?2.5?Metabolic?analysis?of?mutants?with?large?leaf,?late....


圖2.9雜交FI代表型及代謝分析??A,雜交后F]代表型分析:B,雜交F1代代謝分析

圖2.9雜交FI代表型及代謝分析??A,雜交后F]代表型分析:B,雜交F1代代謝分析

AtU6-26_sgRNA-SK基因片段進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化,然后按照I.5.1.2?(7)方法進(jìn)行菌落??PCR驗(yàn)證,并挑選陽(yáng)性克隆搖菌提取質(zhì)粒,按照1.5.1.2?(8)方法對(duì)所提質(zhì)粒進(jìn)行酶切驗(yàn)??證。如圖2.10A所示,菌落PCR產(chǎn)物電泳條帶大小為499?bp,與預(yù)期大小一致。其....



本文編號(hào):3992959

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