目的選擇斑馬魚作為實驗對象,研究阿霉素(doxorubicin,DOX)對其abcb4基因表達的影響,進一步了解abcb4基因在斑馬魚多藥耐藥機制中可能的作用。方法分別以2mL/L二甲基亞砜(DMSO),10μmol/L DOX及含2mL/L DMSO的10μmol/L DOX對斑馬魚胚胎進行藥物處理,另以Eggwater處理的胚胎作為對照組。將正常發(fā)育的4~16個細胞期斑馬魚胚胎,隨機分入以上各組中,藥物處理至120hpf。收集藥物處理下的斑馬魚不同時期胚胎運用實時熒光定量PCR和胚胎原位雜交技術(shù),檢測abcb4基因在斑馬魚中的表達變化情況。結(jié)果相較于對照組,藥物處理的斑馬魚胚胎abcb4基因mRNA表達水平升高(P<0.05),而abcb5基因mRNA表達情況則無明顯變化。通過斑馬魚胚胎原位雜交,均在斑馬魚120hpf胚胎小腸部位發(fā)現(xiàn)有abcb4基因陽性雜交信號,且藥物處理的斑馬魚胚胎在腦及心臟部位發(fā)現(xiàn)abcb4基因陽性雜交信號。結(jié)論 DOX能誘導斑馬魚胚胎abcb4基因表達水平增高,對闡明abcb4基因在斑馬魚多藥耐藥產(chǎn)生機制中的作用具有重要意義。 

【文章來源】：四川大學學報(醫(yī)學版). 2016年01期 第7-13頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗動物、菌株及質(zhì)粒
    1.2 試劑及酶類
    1.3 胚胎收集
    1.4 阿霉素藥物處理
    1.5 abcb4和abcb5基因表達測定
    1.6 斑馬魚abcb4基因片段克隆
    1.7 斑馬魚abcb4基因探針重組質(zhì)粒構(gòu)建
    1.8 地高辛標記的abcb4基因探針制備
    1.9 斑馬魚原位雜交
    1.10 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 DOX對斑馬魚胚胎abcb4、abcb5基因的影響
    2.2 斑馬魚abcb4基因RT-PCR結(jié)果
    2.3 斑馬魚abcb4基因探針重組質(zhì)粒酶切和測序鑒定結(jié)果
    2.4 斑馬魚原位雜交結(jié)果
3 討論



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