發(fā)布時間：2024-07-02 01:45

　　內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白的輸出是由外被體蛋白Ⅱ(coat protein complexⅡ,COPⅡ)包被的囊泡介導(dǎo)的,前期研究發(fā)現(xiàn)敲低COPⅡ運輸途徑的調(diào)控蛋白Rab1,豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的復(fù)制受到顯著的抑制,說明Rab1及其調(diào)控的運輸途徑在CSFV的復(fù)制過程中有重要作用。為了進一步了解COPⅡ運輸途徑對CSFV復(fù)制的影響,探究COPⅡ蛋白轉(zhuǎn)運過程在CSFV復(fù)制中的作用,本研究利用COPⅡ途徑的抑制劑H89處理宿主細胞,在不同的時間點檢測CSFV RNA、E2蛋白以及病毒感染力的變化。過表達和干擾COPⅡ復(fù)合體中的蛋白Sar1b、Sec13和Sec23,并構(gòu)建相應(yīng)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系,進一步檢測COPⅡ運輸途徑對豬瘟病毒復(fù)制的影響并確定影響的關(guān)鍵蛋白,同時利用重疊延伸PCR構(gòu)建關(guān)鍵蛋白Sar1b的激活性突變體和失活性突變體,進一步研究Sar1b對CSFV復(fù)制的影響,獲得以下研究結(jié)果:(1)COPⅡ蛋白Sar1b、Sec13和Sec23促進CSFV的復(fù)制過程。成功構(gòu)建Sar1b、Sec13和Sec23基因的過表達細胞系,CSFV接種過表達細胞系,發(fā)現(xiàn)...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-4重組質(zhì)粒pCDH-Sar1b、pCDH-Sec13和pCDH-Sec23轉(zhuǎn)染PK-15細胞后的熒光檢測Fig.2-4FluorescencedetectionofPK-15cellstransfectedwithrecombinantplasmidspCDH-Sar1b,pCDH-Sec13andpCDH-Sec23

外被體蛋白Ⅱ?qū)ωi瘟病毒復(fù)制的影響都有單一特異的FLAG條帶（圖2-5D、F）；Sar1b蛋白特異性抗體檢測顯示過表達中的蛋白表達量顯著高于對照細胞中的蛋白表達量（圖2-5B）。說明PK-Sar1bK-Sec13和PK-Sec23穩(wěn)定表達的細胞系構(gòu)建成功，可以用于....

圖2-6CSFV在PK-Sar1b細胞系中復(fù)制檢測

外被體蛋白Ⅱ?qū)ωi瘟病毒復(fù)制的影響白表達量在24h和48h均顯著上升（P<0.05）（圖2-7）；PK-Sec23細胞接種CSF在感染早期CSFV的相對RNA復(fù)制量上升顯著（P<0.05或P<0.01），但36h和變化不顯著（P>0.05），E....

圖2-7CSFV在PK-Sec13細胞系中復(fù)制檢測Fig.2-7DetectionofCSFVreplicationinPK-Sec13cellline

A.real-timePCR檢測CSFV在PK-Sec13細胞系中的RNA相對表達量；B.Westernblot檢測PK-Sec13細胞系中的E2蛋白表達量；C.B中條帶的灰度分析A.real-timePCRdetectionofthe....

圖2-8CSFV在PK-Sec23細胞系中復(fù)制檢測Fig.2-8DetectionofCSFVreplicationinPK-Sec23cellline

A.real-timePCR檢測CSFV在PK-Sec23細胞系中的RNA相對表達量；B.Westernblot檢測PK-Sec23細胞系中的E2蛋白表達量；C.B中條帶的灰度分析A.real-timePCRdetectionofthe....

本文編號：3999505