大腸埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)是養(yǎng)殖環(huán)境中最常見的條件致病菌,可引起畜禽不同程度的感染。抗生素作為治療用藥和生長(zhǎng)促進(jìn)劑被廣泛用于養(yǎng)殖業(yè),使得細(xì)菌逐漸產(chǎn)生耐藥性,甚至出現(xiàn)全耐藥菌,更為嚴(yán)重的是這些細(xì)菌的耐藥基因可以通過食物鏈,環(huán)境等途徑在人與動(dòng)物之間互相轉(zhuǎn)播,造成嚴(yán)重的耐藥基因污染,對(duì)養(yǎng)殖業(yè)和人類健康造成巨大的威脅。自超廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素大量使用以來,越來越多的細(xì)菌對(duì)其產(chǎn)生耐藥性。超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)具有很強(qiáng)的酶活性,能水解頭孢菌素,青霉素及單環(huán)β內(nèi)酰胺抗生素氨曲南。能產(chǎn)ESBL的基因有很多,blaaCTXM其中最主要的基因型之一。本研究旨在探究畜禽養(yǎng)殖環(huán)境中大腸埃希菌的耐藥狀況及主要耐藥基因,并對(duì)多藥耐藥菌的質(zhì)粒進(jìn)行精細(xì)基因結(jié)構(gòu)分析。前期我們?cè)谛笄蒺B(yǎng)殖場(chǎng)中的糞便、尿液、土壤及周圍水環(huán)境等樣品中采集了大量菌株,分純保種后進(jìn)行16S菌種鑒定。最終得到大腸埃希氏菌206株,奇異變形桿菌48株,普羅威登斯菌32株。采用K-B法檢測(cè)大腸埃希氏菌的耐藥表型,結(jié)果表明養(yǎng)殖環(huán)境中的大腸埃希氏菌對(duì)四環(huán)素和頭孢唑啉的耐藥性較高,對(duì)替加環(huán)素和多粘菌素的耐藥率最低...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 前言
    1.1 養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境中抗生素的使用
    1.2 多耐藥菌的危害
    1.3 大腸埃希氏菌
    1.4 細(xì)菌耐藥性研究進(jìn)展
    1.5 產(chǎn)超廣譜B-內(nèi)酰胺酶耐藥基因
    1.6 介導(dǎo)耐藥基因轉(zhuǎn)移的移動(dòng)元件
    1.7 細(xì)菌耐藥性檢測(cè)方法
        1.7.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)法
        1.7.2 PCR檢測(cè)
    1.8 測(cè)序和比較基因組學(xué)
    1.9 研究?jī)?nèi)容和意義
        1.9.1 研究?jī)?nèi)容
        1.9.2 研究意義
第2章 養(yǎng)殖環(huán)境中大腸埃希氏菌的多重耐藥傳遞性研究
    2.1 材料
        2.1.1 菌株來源
        2.1.2 儀器與設(shè)備
        2.1.3 試劑與培養(yǎng)基
    2.2 方法
        2.2.1 大腸埃希氏菌的分離與鑒定
        2.2.2 K-B測(cè)定大腸埃希氏菌的耐藥表型
        2.2.3 改良CARBA NP法檢測(cè)細(xì)菌產(chǎn)酶活性
        2.2.4 耐藥基因篩查
        2.2.5 細(xì)菌耐藥性傳遞實(shí)驗(yàn)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 大腸埃希氏菌的分離與鑒定結(jié)果
        2.3.2 大腸埃希氏菌的耐藥表型構(gòu)成
        2.3.3 三重PCR方法可靠性評(píng)價(jià)結(jié)果
        2.3.4 耐藥基因型篩查結(jié)果
        2.3.5 碳青霉烯活性測(cè)定
        2.3.6 接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.4 討論
第3章 多重耐藥質(zhì)粒的測(cè)序與基因組學(xué)分析
    3.1 材料
        3.1.1 菌株來源
        3.1.2 儀器與設(shè)備
        3.1.3 試劑與培養(yǎng)基
    3.2 方法
        3.2.1 基因組提取
        3.2.2 基因組測(cè)序
        3.2.3 質(zhì)粒序列分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 質(zhì)粒P1709008-CTXM和P1710032-CTXM測(cè)序和精細(xì)注釋
        3.3.2 納入分析質(zhì)粒概況
        3.3.3 質(zhì)粒P1709008-CTXM和P1710032-CTXM的骨架區(qū)
        3.3.4 P1709008-CTXM多藥耐藥區(qū)MDR-1分析
        3.3.5 P1709008-CTXM多藥耐藥區(qū)MDR-2和P1710032-CTXM多藥耐藥MDR分析
    3.4 本章小結(jié)
第4章 總結(jié)與展望
    4.1 總結(jié)
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3998113