細(xì)胞核因子-κB (Nuclear factor κappa B)是一種較特殊的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,普遍存在于真核細(xì)胞內(nèi),對宿主先天性免疫反應(yīng)及細(xì)胞增殖、分化和凋亡起到關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-κB可以通過調(diào)控相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄與表達,參與機體的多種生理活動,當(dāng)機體感染細(xì)菌或病毒等致病因素,其信號通路將在一系列酶的作用下被激活,參與宿主的免疫應(yīng)答,它的異�；罨赡苁荘RV導(dǎo)致免疫抑制的重要原因。為獲得豬NF-κB C-Rel亞基序列特性,對PRV感染導(dǎo)致的免疫抑制與NF-κB表達異常的關(guān)聯(lián)性進行研究,本試驗通過NCBI GeneBank中豬核轉(zhuǎn)錄因子-κB C-Rel亞基序列(XM 003125115)設(shè)計特異性引物,對NF-κB C-Rel全序列進行克隆、序列鑒定及生物信息學(xué)分析；對PRV感染PK-15細(xì)胞對C-Rel轉(zhuǎn)錄時相的影響進行分析；并構(gòu)建NF-κB C-Rel真核表達載體,對NF-κB C-Rel亞基真核表達產(chǎn)物對PRV復(fù)制的影響進行探討,結(jié)果如下：1.豬核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB C-Rel亞基的克隆及序列鑒定本實驗采用RT-PCR方法從豬外周血淋巴細(xì)胞中擴增到NF-κB C-R...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 文章綜述、研究目的及意義
    1 核轉(zhuǎn)錄因子-κB概述
        1.1 核轉(zhuǎn)錄因子-κB成員及功能
        1.2 核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號通路的激活途徑
        1.3 核轉(zhuǎn)錄因子-κB的調(diào)節(jié)作用
        1.4 核轉(zhuǎn)錄因子κB的生物學(xué)功能
    2 PRV概述
        2.1 病原
        2.2 培養(yǎng)特性
        2.3 流行病學(xué)
        2.4 臨床癥狀
        2.5 NF-κB在PRV的感染機制中的作用研究
    3 研究目的及意義
第二部分 試驗研究
    第一章 豬NF-κ B C-Rel基因的克隆及序列分析
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料與儀器
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 豬C-Rel亞基的克隆及鑒定
            2.2 豬C-Rel亞基的生物信息學(xué)分析
        3 討論
    第二章 PRV體外感染PK-15細(xì)胞對C-Rel轉(zhuǎn)錄時相的影響
        1 試驗材料與方法
            1.1 細(xì)胞及毒株
            1.2 試驗材料與儀器
            1.3 試驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 普通PCR擴增及鑒定
            2.2 反應(yīng)體系的優(yōu)化
            2.4 靈敏度檢測
            2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.6 C-Rel基因不同時期轉(zhuǎn)錄時相分析
        3 討論
    第三章 豬NF-κB C-Rel亞基真核表達載體的構(gòu)建及C-Rel/P50/P65轉(zhuǎn)染BHK
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料及儀器
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 豬C-Rel亞基真核表達序列的擴增與鑒定
            2.2 豬C-Rel亞基真核表達載體的構(gòu)建及鑒定
            2.3 豬NF-κB C-Rel/P50/P65真核表達載體轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞的表達
            2.4 豬NF-κB C-Rel/p65/p50真核表達載體轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞CPE的影響
            2.5 PRV gE基因熒光定量檢測方法的建立
            2.6 PRV一步生長曲線
        3 結(jié)論
第三部分 結(jié)論
第四部分 參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位之間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3998027