發(fā)布時間：2024-06-28 02:34

　　精原干細胞(spermatogonial stem cells,SSCs)體外培養(yǎng)體系是精子發(fā)生機理研究的基礎,也為轉基因新技術研發(fā)和優(yōu)良家畜保種提供了新途徑,目前小鼠SSCs體外培養(yǎng)體系較為成熟,但是,大動物培養(yǎng)體系尚在探索中。分析表明,機械分離結合酶消化、流式細胞分選及免疫磁珠分選法正在成為SSCs分離純化的主要方法；作為培養(yǎng)體系重要成分,血清和飼養(yǎng)層促進了SSCs的自我更新和增殖。膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(glial cell Line-derived neurotrophic factor, GDNE)在睪丸支持細胞(Sertoli cells, SCs)和SSCs之間扮演重要的角色。SCs分泌的GDNF可促進SSCs的自我更新和增殖,并抑制其分化,但隨后SSCs會由于SCs的過度生長而消亡,SCs的快速生長與SSCs自我更新和增殖間的矛盾關系表明,SSCs的純化是建立其長期培養(yǎng)體系的關鍵。為摸索出一種高效SSCs純化方法,本文采用免疫磁珠分選法,使用干細胞抗體CD90.2進行小鼠SSCs的純化富集。并采用流式細胞分析法和定量PCR驗證了磁珠分選效率。流式細胞分析結果：免疫磁珠...

【文章頁數】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1:小鼠睪丸內生殖細胞系及其對應出現(xiàn)的時期(ARBellveetal.,1977；Dymetal.,2009)

開始減數分裂，出現(xiàn)初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞，導致SSCs比例占睪丸總細胞的比例下降（ARBellveetal.1977)。因此，6d左右的小鼠睪丸中干細胞比例最多（見圖2.1)。另外，對于豬睪丸性原細胞分離的研究表明，酶消化法與機械法相結合比單純的機械法得到的....

圖2.2:自制口吸管

此時，如果不及時將克隆團吸出，SSCs會被迅速生長的支持細胞所淹沒。(1) 將培養(yǎng)皿移至倒置顯微鏡下，在200X鏡下，使用自制口吸管（如圖2.2)將SSCs克隆團吸出，為避免操作過程中造成污染，可在培養(yǎng)皿中滴加甘油與外界空氣隔絕；(2) 吸出的細胞經離心后使用CI-MEM完全培....

圖2.3:免疫磁珠分選細胞流程圖

圖2.3:免疫磁珠分選細胞流程圖Fig2.3：TheflowchartofMACS果

圖2.5:MEF細胞培養(yǎng)及絲裂霄素處理效果（200x)

■a圖2.5:MEF細胞培養(yǎng)及絲裂霄素處理效果（200x)注：A:F0MEF,B：F1MEF,C：F3MEF,D：絲裂霄素C處理后的細胞Fig2.5：TheresultofMEFcultureedandtreatedbyMMC(200x)N....

本文編號：3996310