發(fā)布時(shí)間：2024-06-15 03:46

　　豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種高度接觸性傳染病,以高稽留熱、皮膚和黏膜廣泛出血為臨床特征,死亡率極高。豬瘟的流行給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重影響了生豬及相關(guān)產(chǎn)品的進(jìn)出口貿(mào)易。我國(guó)是世界上豬瘟的主要流行地區(qū)之一,以隱性感染和散發(fā)流行為主要特點(diǎn),流行情況復(fù)雜。開展系統(tǒng)的豬瘟病毒流行病學(xué)調(diào)查,掌握豬瘟流行毒株變化規(guī)律和變異程度,研制新型豬瘟疫苗,對(duì)我國(guó)豬瘟防控工作有著極其重要的意義。具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果分為以下三部分： 1.山東省豬瘟病毒流行毒株的分離和鑒定 本研究以2011年至2012年在山東省規(guī)模化豬場(chǎng)采集的656份樣品為研究對(duì)象,通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)樣品中是否含有豬瘟病毒,結(jié)果136份樣品中檢出豬瘟病毒,陽(yáng)性率為20.66%。該結(jié)果說(shuō)明山東省內(nèi)規(guī)模化豬場(chǎng)普遍存在豬瘟病毒感染。將檢出的陽(yáng)性樣品接種PK-15細(xì)胞,分離病毒,并通過(guò)RT-PCR和real-time PCR進(jìn)行鑒定。 2.山東省豬瘟流行毒株E2基因多態(tài)性研究 為了進(jìn)一步了解山東省內(nèi)豬瘟的流行特點(diǎn),通過(guò)RT-PCR手段獲得分離毒株的E2基因序列,然后將序列與參考毒株的E2基因序列進(jìn)行比對(duì),分析流行毒株的基因多樣性。結(jié)果共...

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 豬瘟概述
        1 CSFV
            1.1 CSFV的基本生物學(xué)特性
            1.2 CSFV的分子生物學(xué)特性
        2 CSF流行現(xiàn)狀
            2.1 國(guó)際流行現(xiàn)狀
            2.2 我國(guó)CSF流行現(xiàn)狀
            2.3 CSFV的遺傳進(jìn)化
        3 CSF的臨床癥狀與病理變化
        4 CSF診斷技術(shù)
            4.1 病原學(xué)診斷技術(shù)
            4.2 血清學(xué)診斷技術(shù)
            4.3 分子生物學(xué)診斷
        5 CSF疫苗研究現(xiàn)狀
            5.1 傳統(tǒng)疫苗
            5.2 亞單位疫苗
            5.3 重組活載體疫苗
            5.4 基因缺失疫苗
            5.5 核酸疫苗
    參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)研究
    第一章 山東省豬瘟病毒流行毒株的分離和鑒定
        摘要
        1 材料
            1.1 樣品
            1.2 試劑
            1.3 細(xì)胞及培養(yǎng)基
            1.4 引物
        2 方法
            2.1 樣品處理
            2.2 病毒核酸的提取
            2.3 病毒核酸的檢測(cè)
            2.4 PCR產(chǎn)物檢測(cè)
            2.5 病毒分離培養(yǎng)
            2.6 病毒的鑒定
        3 結(jié)果
            3.1 病毒核酸的檢測(cè)
            3.2 細(xì)胞毒的鑒定
        4 分析和討論
        ABSTRACT
        參考文獻(xiàn)
    第二章 山東省豬瘟流行毒株E2基因多態(tài)性研究
        摘要
        1 材料
            1.1 毒株、菌株和質(zhì)粒
            1.2 主要材料與試劑
            1.3 引物
        2 方法
            2.1 病毒RNA提取
            2.2 E2基例的擴(kuò)增
            2.3 E2基因的回收和純化
            2.4 PCR產(chǎn)物與克隆載體的連接
            2.5 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
            2.6 質(zhì)粒DNA的提取
            2.7 重組質(zhì)粒的PCR鑒定
            2.8 E2基因序列的測(cè)定和分析
        3 結(jié)果
            3.1 CSFV E2基因的克隆及鑒定
            3.2 CSFV E2基因同源性分析
        4 討論和分析
            4.1 核苷酸和氨基酸同源性分析
            4.2 氨基酸位點(diǎn)變化分析
            4.3 進(jìn)化樹分析
        ABSTRACT
        參考文獻(xiàn)
    第三章 豬瘟病毒E2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及免疫原性鑒定
        摘要
        1 材料
            1.1 質(zhì)粒、血清、細(xì)胞和菌株
            1.2 試劑
            1.3 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.4 引物
        2 方法
            2.1 E2基因的擴(kuò)增與回收
            2.2 E2基因的連接與轉(zhuǎn)化
            2.3 真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
            2.4 重組質(zhì)粒在PK-15細(xì)胞中的表達(dá)和鑒定
            2.5 小鼠免疫
            2.6 免疫原性鑒定
            2.7 數(shù)據(jù)分析
        3 結(jié)果
            3.1 重組質(zhì)粒鑒定結(jié)果
            3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果
            3.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4 討論
        ABSTRACT
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
附錄
致謝



本文編號(hào)：3994878