肌肉生長抑制素基因(Myostatin,MSTN),是TGF-β超家族成員之一,其主要功能是負(fù)向調(diào)控骨骼肌生長發(fā)育。研究報道,MSTN自然突變的牛、羊具有肌肉增加、飼料轉(zhuǎn)化率高、瘦肉率高等特點,被稱為“雙肌牛、雙肌羊”。其為進(jìn)一步研究雙肌性狀的組織形態(tài)學(xué)及遺傳學(xué)機制提供理想的動物模型。迄今,雖然已成功構(gòu)建了MSTN基因敲除小鼠、羊、豬及狗,且均表現(xiàn)出理想的雙肌表型,但還沒有關(guān)于MSTN基因敲除兔的相關(guān)報道。兔子是生物醫(yī)學(xué)研究中一種理想的基因打靶動物模型。與小鼠相比,兔子和人類在生理學(xué)和解剖學(xué)上有更多的相似之處。而與豬、猴相比,兔子發(fā)情期和妊娠期短,產(chǎn)仔數(shù)多,飼養(yǎng)消費低。因此,本實驗利用CRISPR/Cas9技術(shù)制備MSTN基因敲除兔,其不僅可為研究MSTN對肌肉的調(diào)控作用提供合適的動物模型,還可用以提高兔肉質(zhì),滿足日益增長的肉類消費需求。首先,本實驗在兔MSTN基因的第一外顯子上設(shè)計了兩個g RNA,并構(gòu)建有效的MSTN基因打靶載體。通過顯微注射和胚胎移植法,成功構(gòu)建了MSTN基因敲除兔。結(jié)果表明,MSTN基因敲除兔具有典型的雙肌表型,且均無脫靶發(fā)生。此外,子代MSTN基因敲除兔中也出...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第1章 基因編輯技術(shù)的研究概述
        1.1 基因編輯的發(fā)展歷史
        1.2 基因編輯技術(shù)的應(yīng)用及前景
            1.2.1 基因編輯技術(shù)在基因工程領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.2.2 基因編輯技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
    第2章 CRISPR/CAS9的研究概述
        2.1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與作用機制
            2.1.1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)組成
            2.1.2 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的作用機制
        2.2 CRISPR/Cas9技術(shù)存在的問題
        2.3 CRISPR/Cas9技術(shù)的應(yīng)用及前景
            2.3.1 大片段敲除
            2.3.2 外源基因的插入以及基因修復(fù)治療
            2.3.3 調(diào)控內(nèi)源基因的表達(dá)或甲基化水平
    第3章 MSTN基因的研究概述
        3.1 MSTN基因的結(jié)構(gòu)與調(diào)控機制
        3.2 MSTN基因敲除動物的研究進(jìn)展
第二篇 研究內(nèi)容
    第1章 胚胎水平上對CRISPR/CAS9敲除效率的驗證
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗方法
        1.3 實驗結(jié)果
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 MSTN基因敲除兔的建立
        2.1 實驗材料
        2.2 實驗方法
        2.3 實驗結(jié)果
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 F1代雙肌兔的獲得及鑒定
        3.1 實驗材料
        3.2 實驗方法
        3.3 實驗結(jié)果
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡介
作者簡介及攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其他成果
致謝



本文編號：3994818