肌肉生長(zhǎng)抑制素基因(Myostatin,MSTN),是TGF-β超家族成員之一,其主要功能是負(fù)向調(diào)控骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育。研究報(bào)道,MSTN自然突變的牛、羊具有肌肉增加、飼料轉(zhuǎn)化率高、瘦肉率高等特點(diǎn),被稱為“雙肌牛、雙肌羊”。其為進(jìn)一步研究雙肌性狀的組織形態(tài)學(xué)及遺傳學(xué)機(jī)制提供理想的動(dòng)物模型。迄今,雖然已成功構(gòu)建了MSTN基因敲除小鼠、羊、豬及狗,且均表現(xiàn)出理想的雙肌表型,但還沒(méi)有關(guān)于MSTN基因敲除兔的相關(guān)報(bào)道。兔子是生物醫(yī)學(xué)研究中一種理想的基因打靶動(dòng)物模型。與小鼠相比,兔子和人類在生理學(xué)和解剖學(xué)上有更多的相似之處。而與豬、猴相比,兔子發(fā)情期和妊娠期短,產(chǎn)仔數(shù)多,飼養(yǎng)消費(fèi)低。因此,本實(shí)驗(yàn)利用CRISPR/Cas9技術(shù)制備MSTN基因敲除兔,其不僅可為研究MSTN對(duì)肌肉的調(diào)控作用提供合適的動(dòng)物模型,還可用以提高兔肉質(zhì),滿足日益增長(zhǎng)的肉類消費(fèi)需求。首先,本實(shí)驗(yàn)在兔MSTN基因的第一外顯子上設(shè)計(jì)了兩個(gè)g RNA,并構(gòu)建有效的MSTN基因打靶載體。通過(guò)顯微注射和胚胎移植法,成功構(gòu)建了MSTN基因敲除兔。結(jié)果表明,MSTN基因敲除兔具有典型的雙肌表型,且均無(wú)脫靶發(fā)生。此外,子代MSTN基因敲除兔中也出...

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第1章 基因編輯技術(shù)的研究概述
        1.1 基因編輯的發(fā)展歷史
        1.2 基因編輯技術(shù)的應(yīng)用及前景
            1.2.1 基因編輯技術(shù)在基因工程領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.2.2 基因編輯技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
    第2章 CRISPR/CAS9的研究概述
        2.1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與作用機(jī)制
            2.1.1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)組成
            2.1.2 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的作用機(jī)制
        2.2 CRISPR/Cas9技術(shù)存在的問(wèn)題
        2.3 CRISPR/Cas9技術(shù)的應(yīng)用及前景
            2.3.1 大片段敲除
            2.3.2 外源基因的插入以及基因修復(fù)治療
            2.3.3 調(diào)控內(nèi)源基因的表達(dá)或甲基化水平
    第3章 MSTN基因的研究概述
        3.1 MSTN基因的結(jié)構(gòu)與調(diào)控機(jī)制
        3.2 MSTN基因敲除動(dòng)物的研究進(jìn)展
第二篇 研究?jī)?nèi)容
    第1章 胚胎水平上對(duì)CRISPR/CAS9敲除效率的驗(yàn)證
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 MSTN基因敲除兔的建立
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 F1代雙肌兔的獲得及鑒定
        3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡(jiǎn)介
作者簡(jiǎn)介及攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其他成果
致謝



本文編號(hào)：3994818