發(fā)布時(shí)間：2020-12-05 17:41

　　禽巴氏桿菌病(Avian pasteurellosis)又稱(chēng)禽霍亂,是由禽多殺性巴氏桿菌引起的主要侵害雞、火雞禽類(lèi)的一種急性、接觸性、敗血性傳染病。臨床上感染的病禽主要表現(xiàn)為急性死亡,死亡率極高。早期使用磺胺類(lèi)、氯霉素等抗生素預(yù)防治療禽巴氏桿菌病有一定效果。但隨著抗生素的長(zhǎng)期大量使用,一方面導(dǎo)致禽蛋禽肉等禽產(chǎn)品的藥物殘留,另一方面導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)。預(yù)防控制本病的最有效途徑和發(fā)展趨勢(shì)是免疫預(yù)防。禽多殺性巴氏桿菌(Avian pasteurella,Pm)有15種血清型,用不同血清型的巴氏桿菌制備疫苗免疫,發(fā)現(xiàn)各血清型之間并不能提供交叉保護(hù)。當(dāng)前我國(guó)使用的禽多殺性巴氏桿菌疫苗是滅活疫苗,最好的商業(yè)化滅活疫苗對(duì)同源血清型菌株感染的免疫保護(hù)率不到80%,保護(hù)期短。因此,迫切需要提高滅活疫苗的免疫保護(hù)效果和免疫保護(hù)期,或者研發(fā)新型高效的新疫苗,以滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需要。部分學(xué)者對(duì)某些細(xì)菌在限鐵和非限鐵培養(yǎng)進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)的比較分析,發(fā)現(xiàn)限鐵培養(yǎng)的菌液中有大量的免疫原性蛋白,與非限鐵培養(yǎng)的菌液相比呈明顯的上調(diào)表達(dá)�；�于這樣的發(fā)現(xiàn),我們推測(cè)禽巴氏桿菌在限鐵培養(yǎng)條件下也可能會(huì)產(chǎn)生大量的免疫原性相關(guān)蛋白... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：111 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

宿主阻止鐵吸收的機(jī)制Fig.1-1Felimitationduringbacterialinfections

細(xì)菌對(duì)鐵元素的吸收利用包含兩個(gè)步驟，一是對(duì)鐵元素的捕獲，二是對(duì)鐵元運(yùn)輸。鐵離子捕獲方式是由鐵基團(tuán)、血紅蛋白和游離鐵離子組成的捕獲系統(tǒng)(圖 基團(tuán)是細(xì)菌分泌的低分子量鐵螯合劑，與鐵離子結(jié)合的親和力超過(guò)轉(zhuǎn)鐵蛋白和蛋白。由于這些分子太大，無(wú)法通過(guò)革蘭氏陰性細(xì)菌外膜的非選擇性孔進(jìn)行擴(kuò)此核團(tuán)的能量依賴(lài)轉(zhuǎn)運(yùn)是通過(guò)碳依賴(lài)受體介導(dǎo)的。革蘭氏陰性細(xì)菌的周質(zhì)缺TP 或離子梯度，這些梯度可以驅(qū)動(dòng)外膜的轉(zhuǎn)運(yùn)。因此，由 TonB-ExbB-ExbD 系用內(nèi)膜產(chǎn)生的質(zhì)子動(dòng)能的能量介導(dǎo)外膜的轉(zhuǎn)運(yùn)（Noinaj et al., 2010）。在細(xì)胞質(zhì)物結(jié)合蛋白(SBPs)是 ATP 結(jié)合盒(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的成員，它識(shí)別鐵素體鐵復(fù)合物，并最終將該復(fù)合物運(yùn)送到同源的 ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌也表BPs，但這些蛋白被捆綁在細(xì)胞質(zhì)膜上。在革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌中，當(dāng)團(tuán)到達(dá)細(xì)胞質(zhì)時(shí)，結(jié)合的鐵離子通過(guò)還原為二價(jià)鐵離子或通過(guò)鐵質(zhì)團(tuán)的酶降解放，最終釋放出鐵離子作為營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。為了脊椎動(dòng)物產(chǎn)生中性粒細(xì)胞明膠酶相脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL；也被稱(chēng)為脂脂質(zhì)運(yùn)載蛋白或 siderocalin)，它結(jié)合并隔離鐵蛋白(圖 1-2），對(duì)抗鐵離子介導(dǎo)的鐵離子獲取。但一些細(xì)菌會(huì)產(chǎn)生“隱形”的通過(guò)化學(xué)修飾來(lái)逃避 NGAL（Bao et al., 2010）。

圖 2-1 限鐵環(huán)境和普通環(huán)境中 Pm 生長(zhǎng)曲線Fig. 2-1 Pm growth curves in iron-limited environment and common environment2.4.2 疫苗的制備疫苗無(wú)菌檢驗(yàn)結(jié)果：將制備的兩種滅活疫苗無(wú)菌接種于 TSA 平板，37℃培養(yǎng)48h，TSA 平板無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，表明滅活疫苗完全滅活，沒(méi)有雜菌。疫苗保質(zhì)期檢驗(yàn)結(jié)果： 取制備的滅活油乳劑疫苗 4℃放置 12 個(gè)月后，無(wú)分層現(xiàn)象，外觀、性狀均無(wú)變化，表明滅活疫苗保質(zhì)期可達(dá) 12 月，性狀穩(wěn)定。穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果：取制備的滅活油乳劑疫苗疫苗滴于水面上不擴(kuò)散，經(jīng)離心后無(wú)分層現(xiàn)象，外觀、性狀均無(wú)變化，表明疫苗乳化效果良好。疫苗安全性檢測(cè)結(jié)果：各組雞均無(wú)臨床癥狀和發(fā)病死亡情況，接種部位無(wú)紅腫等炎性癥狀，三組雞在第 7d 進(jìn)行解剖觀察，內(nèi)臟組織無(wú)明顯的病變；無(wú)菌接種臟器組織均無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，表明所制備的疫苗安全性好。2.4.3 疫苗免疫后抗體監(jiān)測(cè)對(duì)免疫后的雞群，每周采血一次，分離血清。血清經(jīng) 1:50 稀釋后，通過(guò) ELISA

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
[1]1型鴨疫里默氏桿菌比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究及抗體檢測(cè)方法的建立[D]. 楊依霏.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



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