發(fā)布時(shí)間：2020-11-19 07:26

　　 豬痢疾短螺旋體和致病性大腸桿菌在大型集約化養(yǎng)殖場(chǎng)中廣泛存在,而且不易根除,導(dǎo)致畜禽死亡率升高,生產(chǎn)性能下降,給畜禽養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。體外藥敏試驗(yàn)表明新獸藥喹賽多對(duì)豬痢疾短螺旋體和大腸桿菌抗菌活性較好,在治療雞大腸桿菌病和豬痢疾方面有較大潛力。本實(shí)驗(yàn)主要內(nèi)容是研究喹賽多對(duì)豬痢疾和雞大腸桿菌病的防治作用,通過(guò)PK-PD模型預(yù)測(cè)并制定合理的用藥方案,進(jìn)一步闡明喹賽多對(duì)于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中常見疾病的臨床防治效果,為喹賽多的申報(bào)提供理論依據(jù)。將其發(fā)展成為喹噁啉類藥物的替代產(chǎn)品,對(duì)于養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展意義非凡。1喹賽多在健康和感染豬回腸內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究本實(shí)驗(yàn)選取15 kg左右的斷奶仔豬安裝回腸瘺管,并將12頭豬隨機(jī)分為兩組,對(duì)照組和試驗(yàn)組各6頭。試驗(yàn)組豬人工接種豬痢疾短螺旋體B204,建立豬痢疾疾病模型。對(duì)照組和試驗(yàn)組豬均按30 mg/kg體重單次灌服喹賽多,分別在給藥后0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、12、24 h取回腸內(nèi)容物3～4 mL,樣品經(jīng)前處理后用高效液相色譜法檢測(cè)回腸內(nèi)容物中喹賽多濃度。采用Winnonlin軟件對(duì)藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合,得到喹賽多在健康豬和患病豬回腸內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示,給藥2h喹賽多在健康豬和患病豬回腸內(nèi)的藥物濃度最高,藥物在健康豬回腸內(nèi)的峰濃度Cmax為34.55 μg/mL,藥時(shí)曲線下面積AUC為123.56 h·μg/mL,半衰期T1/2為3.25 h,清除率CL-F為0.24 L/h/kg,滯留時(shí)間MRT為4.20 h;藥物在患病豬回腸內(nèi)的峰濃度Cmax為 33.36 μg/mL,藥時(shí)曲線下面積 AUC 為 120.27 h·μg/mL,半衰期 T1/23.01h,清除率CL-F為0.25 L/h/kg,滯留時(shí)間為4.08 h。2喹賽多在健康和感染雞回腸內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究將120羽一月齡體重1.2 kg左右的三黃雞隨機(jī)分為2組,每組60羽。試驗(yàn)組雞人工接種大腸桿菌AH245構(gòu)建雞大腸桿菌疾病模型。按30 mg/kg體重對(duì)雞單次灌喹賽多,分別在給藥后0.5、1、2、3、4、6、8、12、24 h取回腸內(nèi)容物3～4mL,樣品前處理后用高效液相色譜法對(duì)回腸內(nèi)容物中喹賽多濃度進(jìn)行檢測(cè)。采用Winnonlin軟件對(duì)藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合,得到喹賽多在健康雞和患病雞回腸內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示,喹賽多在健康雞回腸內(nèi)的達(dá)峰時(shí)間T為1.15 h,峰濃度Cmax為157.99μg/mL,藥時(shí)曲線下面積AUC為392.83 h·μg/mL,藥物濃度高于MIC的時(shí)間TMIC為7.01h,半衰期T1/2為0.65h,清除率CL-F為0.076L/h/kg;喹賽多在患病雞回腸內(nèi)的達(dá)峰時(shí)間T為1.31 h,峰濃度Cmax為 111.12μg/mL,藥時(shí)曲線下面積AUC為322.52 h·μg/mL,藥物濃度高于MIC的時(shí)間TMIc為7.65 h,半衰期T1/2為 0.74 h,清除率 CL-F 為 0.093 L/h/kg。3喹賽多藥效學(xué)研究采用肉湯稀釋法測(cè)定厭氧條件下喹賽多在肉湯培養(yǎng)基、空白無(wú)菌回腸液中對(duì)雞大腸桿菌AH245和豬痢疾短螺旋體B204的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)。結(jié)果顯示,體外和半體內(nèi)條件下喹賽多對(duì)大腸桿菌AH245的MIC均為2μg/mL,MBC均為8 μg/mL;喹賽多對(duì)豬痢疾短螺旋體B204的MIC均為0.0625μg/mL,MBC均為0.25μg/mL。通過(guò)測(cè)定高濃度菌液在含藥瓊脂平皿上是否生長(zhǎng),測(cè)得喹賽多對(duì)大腸桿菌AH245的最小防突變濃度(MPC)為128 μg/mL,耐藥選擇突變窗(MSW)為2～128 μg/mL;喹賽多對(duì)豬痢疾短螺旋體B204的MPC為0.25 μg/mL,MSW 為 0.0625～0.25 μg/mL。根據(jù) MIC 結(jié)果,設(shè)置 0 MIC、1/2 MIC、1 MIC、2 MIC、4 MIC、8 MIC、16 MIC、32 MIC 一系列不同濃度的藥物,測(cè)定喹賽多對(duì)大腸桿菌AH245和豬痢疾短螺旋體B204的殺菌效果。結(jié)果表明,隨著藥物濃度的增加,喹賽多殺菌所需時(shí)間變短。當(dāng)喹賽多濃度高于4 MIC時(shí)僅用4 h就可以將AH245完全殺滅,在喹賽多濃度為1 MIC時(shí),18 h時(shí)大腸桿菌出現(xiàn)恢復(fù)生長(zhǎng)現(xiàn)象;喹賽多濃度高于8 MIC,2～4 h內(nèi)可達(dá)到完全殺滅B204的效果,1～2MIC能明顯抑制B204的生長(zhǎng)。取各時(shí)間點(diǎn)過(guò)濾除菌的含藥回腸內(nèi)容物,分別接種同濃度的AH245和B204菌液,37℃厭氧條件下進(jìn)行孵育,在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行涂板計(jì)數(shù),繪制半體內(nèi)殺菌曲線。結(jié)果表明,喹賽多在豬和雞腸內(nèi)容物中都呈現(xiàn)明顯的濃度依賴特性,與體外試驗(yàn)結(jié)果一致。4半體內(nèi)PK-PD模型擬合與給藥方案制定利用抑制型Sigmoid Elax模型對(duì)健康組和感染組的AUC24/MIC與細(xì)菌數(shù)量變化的對(duì)數(shù)值進(jìn)行擬合。由體外藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果可知,喹賽多呈濃度依賴性,故選擇參數(shù)AUC24/MIC進(jìn)行Sigmoid Emax方程的擬合。結(jié)果顯示患病雞的半體內(nèi)PK-PD方程為:E=2.69-8.63*C1.97/200.791.97+C1.97,當(dāng)E=0、-3、-4(抑菌、殺菌、根除)時(shí),對(duì)應(yīng)的C值,即半體內(nèi)AUC/MIC值分別為134.31、280.74、376.40。結(jié)合給藥方程(Dose=(AUC24/MIC)×MCI×CL/fu×F可得不同條件下針對(duì)雞大腸桿菌病的預(yù)防給藥劑量為24.98 mg/kg/d,治療給藥劑量為52.22 mg/kg/d,根除給藥劑量為70.01 mg/kg/d。患病豬的半體內(nèi)PK-PD方程為:E= 2.43-7.87*C3.71/487.393.71+C3.71,當(dāng)E=0、-3、-4(抑菌、殺菌、根除)時(shí),對(duì)應(yīng)的半體內(nèi)AUC/MIC值分別為360.37、569.81、695.19。結(jié)合給藥方程(Dose =(AUC24/MIC)×MIC× CL/fu×F,可得不同條件下針對(duì)豬痢疾的預(yù)防給藥劑量為5.85mg/kg/d,治療給藥劑量為8.83mg/kg/d,根除給藥劑量11.35 為 mg/kg/d。5模型驗(yàn)證用大腸桿菌AH245感染雞建立雞大腸桿菌疾病模型,將喹賽多按52.22 mg/kg/d(250 ppm)的劑量混飼,對(duì)試驗(yàn)組的患病雞進(jìn)行給藥治療,結(jié)果顯示該劑量治療.后喹賽多對(duì)試驗(yàn)組雞的治愈率為88.89%。用豬痢疾短螺旋體B204感染豬建立豬痢疾疾病模型,將喹賽多按8.83 mg/kg/d(160 ppm)的劑量混飼,對(duì)試驗(yàn)組患病豬進(jìn)行給藥治療,結(jié)果顯示該劑量喹賽多治療后試驗(yàn)組豬無(wú)死亡,保護(hù)率為83.33%。綜上所述,本課題闡明了喹賽多對(duì)大腸桿菌和豬痢疾短螺旋體的抗菌作用特點(diǎn),揭示了喹賽多在豬、雞消化道內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征,通過(guò)半體內(nèi)PK-PD模型的研究,確定了喹賽多在防治雞大腸桿菌病和豬痢疾時(shí)的給藥方案,為新獸藥的申報(bào)和喹賽多的臨床合理應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S858.28;S858.31
【部分圖文】：

圖 3-1 喹賽多對(duì) 117 株雞源大腸桿菌 MIC 值的分布圖（A）和累積分布圖（B）Fig. 3-1 The distribution (A) and cumulative distribution (B) of MIC for cyadox against 117E. coli strains from chicken3.1.2 血清型本實(shí)驗(yàn)采用玻片凝集法對(duì) 117 株雞源大腸桿菌血清型進(jìn)行了鑒定。鑒定出 16 株

圖 3-2 空白雞腸內(nèi)容物（a）、2 μg/mL 喹賽多標(biāo)準(zhǔn)溶液(b)和添加 2 μg/mL 喹賽回腸內(nèi)容物（c）的高效液相色譜圖-2 Chromatograms of blank ileum content (a), cyadox standard solution at concentratμg/mL(b) and spiked ileum content with cyadox at 2 μg/mL(c)

圖 3-3 喹賽多的標(biāo)準(zhǔn)曲線及在雞腸內(nèi)容物中的工作曲線Fig. 3-3 Standard curve and working curve of cyadox in broiler ileum content準(zhǔn)確度與精密度 雞回腸內(nèi)容物中喹賽多的添加回收率與日間變異系5。當(dāng)回腸內(nèi)容物中添加喹賽多濃度為 0.2 μg/mL、4 μg/mL 和 32 μg/mL 時(shí)
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本文編號(hào)：2889891