發(fā)布時間：2020-11-17 15:13

　　 隨著抗生素的濫用,作為危害嚴重食源性致病菌之一的大腸桿菌,其耐藥性不斷增強,多重耐藥譜逐步變寬。肉雞作為大腸桿菌傳播的主要載體,在屠宰加工過程中容易通過食物鏈傳到人體,探究家禽屠宰場加工生產(chǎn)鏈中大腸桿菌的污染狀況,追蹤大腸桿菌污染的主要環(huán)節(jié)顯得尤為重要。本研究以浙江省某大型家禽屠宰場為采樣點,檢測空氣沉降微生物的污染指標,評估屠宰場不同區(qū)域的微生物污染水平,以分離獲得的大腸桿菌為主要研究對象,檢測毒力基因并評估其耐藥性,通過ERIC-PCR分型探究分離株的親緣關(guān)系。(1)本實驗取屠宰場廠房外部和內(nèi)部空氣沉降微生物,檢測其污染指標,并通過16S rRNA V3-V4的Illumina高通量測序方法分析其菌群結(jié)構(gòu)多樣性。結(jié)果顯示屠宰后八個車間的菌落總數(shù)、腸桿菌科、霉菌和酵母數(shù)量均有所增加,宰殺瀝血間菌落總數(shù)達到最高達到1100 cfu/皿,浸燙脫羽間腸桿菌科數(shù)達到最高1500cfu/皿,宰殺瀝血間霉菌、酵母數(shù)量分別最高達到175 cfu/皿、50cfu/皿。比較屠宰場廠房內(nèi)外部的空氣沉降細菌菌群結(jié)構(gòu),從門的水平上來看,屠宰場廠內(nèi)和廠外優(yōu)勢門相同,均為厚壁菌門(Firmicute)、放線菌門(Actinobacteria)和變形菌門(Proteobacteria)。但從屬的水平上屠宰場廠房外和屠宰場廠內(nèi)優(yōu)勢屬幾乎都不相同,兩者存在不同屬類別的細菌污染。屠宰場廠房內(nèi)空氣中主要優(yōu)勢屬葡萄球菌屬(Staphylococcus),埃希氏菌屬(Escherichia),假單胞菌屬(Pseudomonas),而屠宰場廠房外空氣中主要優(yōu)勢屬是芽孢桿菌屬(Bacillus),(Phycicoccus),考克氏菌屬(Kocuria)。(2)本實驗取屠宰場的存在水體,以及用無菌紗布擦拭各區(qū)域的地面和器械表面采集微生物進行培養(yǎng)后,通過16S rRNA V3-V4的Illumina高通量測序方法分析其菌群結(jié)構(gòu)多樣性,并用PCR對細菌的9大類24種耐藥基因進行檢測。結(jié)果表明,屠宰場不同區(qū)域水體、地面和屠宰器械表面微生物均以變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)和放線菌門(Actinobacteria)為主,其相對豐度分別為45.18%~87.74%、0.09%~33.46%、3.34%~28.09%;優(yōu)勢菌屬為不動桿菌屬(Acinetobacter)、鏈球菌屬(Streptococcus)、嗜冷桿菌屬(Psychrobacter)、水棲菌屬(Enhydrobacter)、皮生球菌屬(Dermacoccus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、乳球菌屬(Tetragenococcus),金黃桿菌屬(Chryseobacterium)和弓形桿菌屬(Arcobacter),約占總類群40%。各樣品中共檢測到21種耐藥基因,其中sulⅠ、sulⅡ、qnrS、blaTEM和aadA1的檢出率為100%,floR、tetA和ereA的檢出率為88.9%以上。(3)本實驗從收集的屠宰場空氣沉降微生物、存在水體、地面、器械表面和冷鮮雞共240個樣品中分離大腸桿菌,檢測大腸桿菌的毒力基因并評估其耐藥性。結(jié)果顯示在預冷間的預冷水、外界的干凈屠宰用水、包裝間和冷藏間的空氣中未檢出大腸桿菌,但在其他區(qū)域均有檢測出大腸桿菌。大腸桿菌耐藥基因檢測結(jié)果表明,來源于冷鮮雞表面ESBL型大腸桿菌檢出率最高,對單環(huán)β內(nèi)酰胺類的氨芐西林(62.0%)、磺胺類的復方新諾明(55.4%)耐藥最明顯,多重耐藥菌株多達33株(35.9%),最多耐7種類型的抗生素;除了青霉素類基因(mecC)和多粘菌素類基因(mcr-1)未檢出,耐藥基因pmrA(92.4%)、blaTEM(78.3%)和qnrS(53.3%)檢出率較高。此外,毒力基因檢測結(jié)果顯示腸毒素性大腸桿菌(ETEC)毒力基因est檢出率最高,高達31.5%。空氣來源的大腸桿菌毒力基因檢出率種類最多,檢測出stx、est、elt和aggR這四種毒力基因。(4)本實驗對分離獲得的92株大腸桿菌進行ERIC-PCR分型分析,結(jié)果顯示在以相似系數(shù)0.80的水平上,不同來源的家禽屠宰場大腸桿菌分離株可以分型為11種菌型(A~H),其中E型有32株,為優(yōu)勢菌型,來源包括雞肛門拭子、掛禽間冷鮮雞、凈膛間掛鉤紗布和預冷間空氣等不同環(huán)節(jié)的樣品,由此可見同一屠宰場的空氣、水體、器械、地面和冷鮮雞相互之間存在著大腸桿菌的交叉污染。
【學位單位】：中國計量大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S852.6
【部分圖文】：

研究技術(shù)路線

掛禽間宰殺瀝血間浸燙脫羽間凈膛間2. 1 材料與方法2.1.1 實驗儀器和試劑主要儀器如下表 2-1。表 2. 1 主要儀器Table 2.1 Main equipment儀器名稱 生產(chǎn)廠家恒溫培養(yǎng)箱、烘箱 上海一恒科學儀器有限公司天平 北京賽多利斯天平有限公司主要試劑：平板計數(shù)瓊脂（PCA)培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基均由杭州微生物試劑有限公司提供。2.1.2 樣本的采集2.1.2.1 屠宰加工流程

16Figure 2.7 The top 10 phylum (A) and genus (B) of each sample in the external air ofslaughterhouse：BH，屠宰前掛禽間；BS，屠宰前宰殺瀝血間；BD，屠宰前浸燙脫羽間；BE，屠宰前；BPr，屠宰前預冷間；BPa，屠宰前包裝間；BRe，屠宰前冷藏間；BV，屠宰前內(nèi)臟間；宰前屠宰場廠房外四周；AH，屠宰后掛禽間；AS，屠宰后宰殺瀝血間；AD，屠宰后浸間；AE，屠宰后凈膛間；APr，屠宰后預冷間；APa，屠宰后包裝間；ARe，屠宰后冷，屠宰后內(nèi)臟間；AO，屠宰后屠宰場廠房外四周。te:BH，hanging district before slaughter；BS，slitting and blood draining district before slaug，scalding and dehairng district before slaughter；BE，eviscerating district before slaughter；-cooling district before slaughter；BPa，Packing district before slaughter；BRe，Refrigerated dfore slaughter；BV，Visceral district before slaughter；BO，around the factory before slau，hanging district after slaughter；AS，slitting and blood draining district after slaughter；lding and dehairng district after slaughte；AE，eviscerating district after slaughter；APr，Pre-ctrict after slaughter；APa，Packing district after slaughter；ARe，Refrigerated district after slaug，Visceral district after slaughter；AO，outside the factory after slaughter結(jié)構(gòu)
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本文編號：2887650