發(fā)布時(shí)間：2020-11-17 10:29

　　 脂質(zhì)代謝是體內(nèi)重要且復(fù)雜的生化反應(yīng),指生物體內(nèi)脂質(zhì)在各種相關(guān)酶的催化下,消化吸收、合成與分解的過(guò)程,加工成機(jī)體所需要的物質(zhì),確保正常生理機(jī)能的運(yùn)作,對(duì)于生命活動(dòng)具有重要意義。脂質(zhì)沉積是脂質(zhì)代謝中重要的一部分,涉及到諸多領(lǐng)域,包括畜牧行業(yè)家禽家畜的肉質(zhì)。近年來(lái),天然產(chǎn)物參與成脂調(diào)控的研究逐漸成為研究的熱點(diǎn),因此本研究以3T3-L1脂肪細(xì)胞為研究對(duì)象,通過(guò)添加天然小分子龍血素B(Loureirin B),檢測(cè)其對(duì)脂肪細(xì)胞的成脂情況及其影響成脂的機(jī)制,進(jìn)而探究其對(duì)脂質(zhì)代謝的影響,從而為調(diào)控豬的脂肪沉積提供理論依據(jù)。本研究主要獲得以下結(jié)果:1、在3T3-L1脂肪細(xì)胞增殖期加入80μmol/L的Loureirin B處理24h,CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞活力,結(jié)果表明80μmol/L的Loureirin B對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞的活力無(wú)顯著影響;2、龍血素B(80μmol/L)對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞的增殖有抑制作用。在3T3-L1脂肪細(xì)胞增殖期加入80μmol/L的Loureirin B處理48h-72h,利用EdU染色可發(fā)現(xiàn)Loureirin B處理可顯著降低細(xì)胞的數(shù)目(P0.01);RT-PCR檢測(cè)增殖相關(guān)基因的mRNA表達(dá),Western blot檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Loureirin B處理可顯著下調(diào)促增殖基因CyclinD、CyclinE的mRNA和蛋白的表達(dá)(P0.01),上調(diào)抑增殖基因的P53 mRNA水平(P0.05),與增殖有關(guān)的ERK信號(hào)通路中ERK1/2的磷酸化水平下降(P0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖周期,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Loureirin B處理后,使S期的細(xì)胞數(shù)目減少,可使細(xì)胞的增殖周期阻滯在G2期。3、龍血素B(80μmol/L)顯著促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞的成脂與分化。在3T3-L1脂肪細(xì)胞的分化期加入80μmol/L的Loureirin B,油紅O染色發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比Loureirin B能顯著促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞內(nèi)脂滴的合成;RT-PCR和Western blot檢測(cè)相關(guān)基因和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Loureirin B處理后在mRNA和蛋白水平上,脂合成和脂分解相關(guān)基因和蛋白表達(dá)量均上升,但脂質(zhì)合成相關(guān)基因的mRNA和蛋白的表達(dá)水平上調(diào)幅度較高。為了進(jìn)一步探究Loureirin B促進(jìn)成脂的機(jī)制,我們首先確定了其可能通過(guò)GPR120來(lái)發(fā)揮作用,通過(guò)RT-PCR和Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)處理組GPR120的mRNA水平和蛋白表達(dá)都顯著上升(P0.01),加入GPR120的抑制劑AH7614后,細(xì)胞內(nèi)的脂滴明顯減少,通過(guò)RT-PCR和Western blot得到的結(jié)果與表型一致;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),胰島素信號(hào)通路的敏感性增強(qiáng),促進(jìn)了GLUT4的轉(zhuǎn)位,進(jìn)而促進(jìn)葡萄糖的吸收,最終促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的合成。綜上所述,80μmol/L的天然小分子龍血素B可顯著抑制脂肪細(xì)胞的增殖,在分化期可顯著促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的沉積,是一種潛在的促進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)脂肪沉積、改善肉品質(zhì)的候選天然小分子。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：S852.2
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
文獻(xiàn)綜述
    第一章 文章綜述
        1.1 脂質(zhì)合成
            1.1.1 脂質(zhì)合成的途徑
        1.2 脂肪細(xì)胞分化的分子機(jī)制
            1.2.1 脂肪合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
            1.2.2 脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中的PI3K-Akt信號(hào)通路
            1.2.3 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4（GLUT4）
        1.3 天然小分子研究進(jìn)展
            1.3.1 天然小分子
            1.3.2 天然小分子的靶標(biāo)研究
            1.3.3 天然小分子龍血素B的研究進(jìn)展
            1.3.4 天然產(chǎn)物及Loureirin B調(diào)控脂肪沉積研究現(xiàn)狀
試驗(yàn)研究
    第二章 LOUREIRIN B對(duì)3T3-L1 脂肪細(xì)胞增殖的影響
        前言
        2.1 材料與方法
            2.1.1 細(xì)胞
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 試劑
            2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.5 數(shù)據(jù)處理
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 Loureirin B處理3T3-L1脂肪細(xì)胞濃度的篩選
            2.2.2 Loureirin B對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞增殖的影響
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
    第三章 LOUREIRIN B對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控作用
        前言
        3.1 材料與方法
            3.1.1 細(xì)胞
            3.1.2 主要儀器
            3.1.3 試劑
            3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            3.1.5 數(shù)據(jù)處理
        3.2 結(jié)果與分析
            3.2.1 Loureirin B對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化的影響
            3.2.2 Loureirin B對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因表達(dá)的影響
            3.2.3 Loureirin B對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 LOUREIRIN B對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化調(diào)控的機(jī)制研究
        前言
        4.1 材料與方法
            4.1.1 細(xì)胞
            4.1.2 主要儀器
            4.1.3 試劑
            4.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
            4.1.5 數(shù)據(jù)處理
        4.2 結(jié)果與分析
            4.2.1 Loureirin B依賴于GPR120來(lái)調(diào)控3T3-L1脂肪細(xì)胞的分化
            4.2.2 Loureirin B促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化的通路研究
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)與下一步研究計(jì)劃
    結(jié)論
    創(chuàng)新點(diǎn)
    下一步研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介

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本文編號(hào)：2887397