發(fā)布時間：2020-11-16 17:06

　　 免疫是畜禽機體防衛(wèi)外界病原微生物侵害的主要手段,也是現(xiàn)代化養(yǎng)殖保健的基礎(chǔ)。免疫力低下是導(dǎo)致畜禽病毒性疾病、細菌性病發(fā)生的主要誘因之一,給畜牧養(yǎng)殖業(yè)造成極大的損失。具有多種生理活性,特別是促進細胞免疫和體液免疫的水平,提高動物機體的免疫力。所以,多糖作為一種優(yōu)秀的免疫佐劑,具有很好的研究價值。為了深入探討淫羊藿多糖的免疫學(xué)活性,本研究擬采用響應(yīng)面法探討淫羊藿多糖酶法提取工藝,優(yōu)化最佳提取條件;通過正交優(yōu)化,以多糖轉(zhuǎn)移率為指標,探討淫羊藿多糖最佳醇沉條件;以腹腔巨噬細胞釋放NO的產(chǎn)量和淋巴細胞增殖率為指標,探討不同醇沉濃度得到的淫羊藿多糖的活性及淫羊藿多糖體外對免疫細胞的作用;通過動物試驗,考察淫羊藿多糖對新城疫(ND)抗體效價以及免疫器官組織結(jié)構(gòu)的影響,系統(tǒng)地研究淫羊藿多糖促免疫作用機理,為臨床獲得提高免疫力的新中獸藥提供理論依據(jù)。試驗結(jié)果如下:1、響應(yīng)面法優(yōu)化纖維素酶輔助提取淫羊藿多糖工藝:采用纖維素酶輔助提取法,通過Box-Behnken三因素三水平的響應(yīng)面法優(yōu)化其提取因素,ANOVA方差分析結(jié)果以及兩因素相互作用3D和等高線圖顯示,最佳提取條件為纖維素酶濃度110U/mL,酶提溫度60℃,酶提時間100 min,淫羊藿多糖的提取率為10.06%,與預(yù)測值10.199%非常接近,可達預(yù)測值的98.6%。2、正交設(shè)計法優(yōu)化淫羊藿多糖最佳醇沉條件:通過對L_9(3~4)的正交試驗結(jié)果進行方差分析顯示,當濃縮比為1∶2,乙醇濃度為80%,乙醇體積倍數(shù)為4倍,醇沉時間為12 h時,淫羊藿多糖轉(zhuǎn)移率達到72.27%,多糖轉(zhuǎn)移率最高。3、淫羊藿多糖體外刺激巨噬細胞釋放NO試驗結(jié)果:5個不同醇沉濃度得到的淫羊藿多糖均能刺激巨噬細胞釋放NO,醇沉濃度為50%時多糖活性最好,且具有劑量依賴作用,隨著多糖濃度的升高NO釋放量明顯增大。4、淫羊藿多糖對雞脾臟淋巴細胞最大安全濃度測定:通過MTT和細胞病變觀察法,測得的淫羊藿多糖最大安全濃度為2500.00μg/m L。5、淫羊藿多糖促進雞脾臟淋巴細胞增殖試驗結(jié)果:在濃度312.50~2500.00μg/m L范圍內(nèi),淫羊藿多糖單獨和協(xié)同LPS均能顯著促進脾臟淋巴細胞增殖,且均在濃度為1250.00μg/m L時,脾臟淋巴細胞增殖指數(shù)和增殖率最高。6、淫羊藿多糖促進雞免疫效果試驗結(jié)果:(1)在免疫后的不同時間,高劑量組和中劑量組新城疫抗體效價均顯著(P0.05)高于空白對照和免疫對照組;(2)通過對胸腺、脾臟、法氏囊三種免疫器官組織學(xué)觀察,結(jié)果顯示,淫羊藿多糖能夠促進免疫器官的發(fā)育。
【學(xué)位單位】：聊城大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S853.7
【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
第一章 緒論
    1.1 研究目的及意義
    1.2 淫羊藿的藥理作用及其應(yīng)用研究現(xiàn)狀
    1.3 中藥多糖的提取純化及其藥理活性研究概況
    1.4 淫羊藿多糖的提取純化研究概況
    1.5 淫羊藿多糖生物學(xué)活性的研究概述
第二章 響應(yīng)面法優(yōu)化纖維素酶輔助提取淫羊藿多糖工藝
    2.1 試驗材料與儀器
    2.2 試驗設(shè)計與方法
    2.3 結(jié)果
    2.4 討論
第三章 正交設(shè)計法優(yōu)化淫羊藿多糖醇沉工藝研究
    3.1 試驗材料與儀器
    3.2 試驗設(shè)計與方法
    3.3 結(jié)果
    3.4 討論
第四章 淫羊藿多糖體外對免疫細胞的作用研究
    4.1 試驗材料與儀器
    4.2 試驗設(shè)計與方法
    4.3 結(jié)果
    4.4 討論
第五章 淫羊藿多糖對雞免疫功能的影響
    5.1 試驗材料與儀器
    5.2 試驗設(shè)計與方法
    5.3 結(jié)果與分析
    5.4 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
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本文編號：2886461