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鉬鎘聯(lián)合染毒對鴨原代腎小管上皮細胞凋亡的影響

發(fā)布時間:2020-11-16 10:06
   為了探究鉬鎘聯(lián)合染毒對鴨原代腎小管上皮細胞凋亡的影響,本研究選取10-15日齡雛鴨,通過篩網(wǎng)過濾法和酶消化法建立鴨腎小管上皮細胞體外培養(yǎng)模型。硫酸鎘(3CdSO_4·8H_2O)和鉬酸銨((NH_4)_6Mo_7O_(24)·4H_2O)作為毒源。試驗分為Control組(0μmol/L Cd+0μmol/L Mo)、LCd組(2.5μmol/L Cd)、HCd組(5μmol/L Cd)、LMo組(480μmol/L Mo)、HMo組(960μmol/L Mo)、LMoCd組(2.5μmol/L Cd+480μmol/L Mo)、HMoCd組(5μmol/L Cd+960μmol/L Mo),將鉬和鎘添加到無血清培養(yǎng)基中,染毒12 h后,分別用紫外分光光度計法測定鴨腎小管上皮細胞膜ATP酶(Ca~(2+)-ATPase、Na~+/K~+-ATPase)的活性,流式細胞法測定細胞凋亡率、細胞內(nèi)鈣離子水平、細胞活性氧水平、細胞內(nèi)pH變化、細胞線粒體膜電位變化及熒光定量PCR法測定相關凋亡基因Bcl-2、Bak-1和Caspase-3的mRNA表達變化量;此外,通過吖啶橙(AO)/溴化乙錠(EB)染色法觀察細胞凋亡情況。結果如下:1.各染毒組細胞膜ATP酶(Ca~(2+)-ATPase、Na~+/K~+-ATPase)的活性均極顯著(P0.01)低于Control組,且鉬鎘聯(lián)合組細胞膜ATP酶(Ca~(2+)-ATPase、Na~+/K~+-ATPase)的活性均顯著或極顯著(P0.05或P0.01)低于相對應的鉬鎘單獨染毒組。2.各染毒組細胞凋亡率、細胞內(nèi)鈣離子水平、細胞活性氧水平均極顯著(P0.01)高于Control組,且鉬鎘聯(lián)合組細胞凋亡率、細胞內(nèi)鈣離子水平、細胞活性氧水平均顯著或極顯著(P0.05或P0.01)高于相對應的鉬鎘單獨染毒組;細胞內(nèi)pH、細胞線粒體膜電位均極顯著(P0.01)低于Control組,且鉬鎘聯(lián)合組細胞內(nèi)pH、細胞線粒體膜電位均顯著或極顯著(P0.05或P0.01)低于相對應的鉬鎘單獨染毒組。3.各染毒組的Bcl-2 mRNA表達量均極顯著低于Control組(P0.01),Bak-1和Caspase-3 mRNA表達量均極顯著高于Control組(P0.01)。聯(lián)合染毒組的Bcl-2mRNA表達量極顯著低于相應單獨染毒組,Bak-1和Caspase-3的mRNA表達量則極顯著(P0.01)高于相應單獨染毒組。4.吖啶橙(AO)/溴化乙錠(EB)染色顯示各染毒組均出現(xiàn)凋亡細胞,聯(lián)合染毒組的細胞凋亡數(shù)均多于相應的單獨染毒組。結論:鉬鎘染毒導致鴨腎小管上皮細胞內(nèi)活性氧水平和鈣離子濃度升高,細胞膜ATPase活性、細胞pH和線粒體膜電位降低,Bcl-2 mRNA表達下調(diào),Bak-1、Caspase-3mRNA表達上調(diào);由此可知,鉬鎘通過氧化應激介導的細胞凋亡途徑誘導鴨腎小管上皮細胞凋亡;鉬、鎘對鴨腎小管上皮細胞的毒性具有劑量-效應關系,且鉬鎘之間呈協(xié)同作用。
【學位單位】:江西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】:碩士
【學位年份】:2019
【中圖分類】:S859.8
【部分圖文】:

鴨腎,線粒體膜電位


20圖 6 鉬鎘染毒 12 h 對鴨腎小管上皮細胞線粒體膜電位的影響Fig 6 Effect of Mo and Cd on mitochondrial membrane potential in renal tubular epithelial cells3.6 鉬鎘染毒 12 h 對鴨腎小管上皮細胞凋亡的影響3.6.1 鉬鎘染毒 12 h 對鴨腎小管上皮細胞凋亡率的影響如圖 7 所示,與對照組比較,各攻毒組的細胞凋亡率均極顯著上升(P<0.01);與 LMo 組比較,HMo 組、LMoCd 組和 HMoCd 組的細胞凋亡率均極顯著上升(P<0.01);與 HMo 組比較,HMoCd 組的細胞凋亡率極顯著上升(P<0.01);與LCd 組比較,HCd 組、LMoCd 組和 HMoCd 組的細胞凋亡率均極顯著上升(P<0.01);與 HCd 組比較,HMoCd 組的細胞凋亡率極顯著上升(P<0.01);與 LMoCd 組比較,HMoCd 組的細胞凋亡率極顯著上升(P<0.01)。

吖啶橙,溴化乙錠,凋亡細胞


鉬鎘聯(lián)合染毒對鴨原代腎小管上皮細胞凋亡的影響3.6.2 吖啶橙(AO)/溴化乙錠(EB)染色結果如圖 8 所示,對照組細胞 AO/EB 染色基本為綠色,細胞存活率高、凋亡率低;各染毒組均見有凋亡細胞,細胞染為黃色、橙色或紅色;隨著染毒劑量的提高,凋亡細胞數(shù)也隨之增多;聯(lián)合染毒組的細胞凋亡數(shù)比單獨染毒組的多。
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