發(fā)布時(shí)間：2020-11-14 09:34

　　 哺乳動(dòng)物的胎盤是由胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞和母體的子宮內(nèi)膜細(xì)胞組成的,綿羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞可以侵入到母體子宮內(nèi)膜組織中進(jìn)行營養(yǎng)、氣體和激素的物質(zhì)交換。在孕體植入過程中涉及到孕體滋養(yǎng)層對(duì)合、附著和粘附到子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞(endometrial luminal epithelial cells,ELECs)上。在孕體外胚層內(nèi)的是絨毛膜,其中的雙核滋養(yǎng)層細(xì)胞,又被稱為滋養(yǎng)層巨型雙核細(xì)胞(trophoblast giant binucleate cells,TBCs)。有研究表明,TBCs與ELECs發(fā)生融合形成三個(gè)細(xì)胞核的多核細(xì)胞,TBCs再次與三個(gè)核的滋養(yǎng)層細(xì)胞發(fā)生融合,形成多核合胞體,最終形成胎盤。目前沒有關(guān)于多核細(xì)胞的形成與ELECs相關(guān)聯(lián)的研究報(bào)道。本研究探討的關(guān)鍵問題是在多核細(xì)胞形成中是否受到ELECs的調(diào)控以及在ELECs的參與下是否促進(jìn)多核細(xì)胞的形成。并以原代綿羊胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞(sheep trophoblast cells,STCs)和ELECs的共培養(yǎng)體系為研究對(duì)象,通過添加不同濃度的雌二醇(17β-Estrodiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)以研究其對(duì)綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層多核細(xì)胞形成的影響,為探究綿羊胎盤的生長發(fā)育提供試驗(yàn)依據(jù)。為了探討絨毛膜滋養(yǎng)層多核細(xì)胞的形成機(jī)制,本研究通過酶消化法分離培養(yǎng)原代STCs和ELECs,結(jié)果表明,倒置相差顯微鏡下STCs形態(tài)呈多角形,片狀鋪展生長,ELECs形態(tài)呈鵝卵石樣,呈鋪路石狀生長;采用免疫熒光技術(shù)分別對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)行鑒定,結(jié)果表明,原代STCs角蛋白CK-7表達(dá)呈陽性,原代ELECs角蛋白CK-18表達(dá)呈陽性;將兩種細(xì)胞共培養(yǎng),并觀察多核細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài),分析不同數(shù)量的ELECs對(duì)多核細(xì)胞數(shù)量的影響,并設(shè)立時(shí)間梯度,摸索出最佳的共培養(yǎng)條件,結(jié)果表明,當(dāng)絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞與子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞數(shù)量(STCs與ELECs)比值為2:1,培養(yǎng)時(shí)間48 h時(shí),綿羊滋養(yǎng)層多核細(xì)胞的數(shù)量最多,且結(jié)果具有顯著性意義(p0.05);瞬時(shí)轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pEGFP-Cl到ELECs中,并添加原代STCs,在最佳共培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng),利用CK-7標(biāo)記并且采用激光共聚焦顯微鏡觀察多核細(xì)胞的形態(tài)。結(jié)果表明,絨毛膜滋養(yǎng)層多核細(xì)胞角蛋白CK-7表達(dá)呈陽性,呈現(xiàn)特異的紅色,且在細(xì)胞質(zhì)中有pEGFP-Cl特異的綠色熒光,證明了在多核細(xì)胞中也表達(dá)了轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pEGFP-Cl ELECs的特異性熒光蛋白,說明ELECs參與了絨毛膜滋養(yǎng)層多核細(xì)胞的形成;分別采用E2和P4共同使用對(duì)共培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行刺激,觀察多核滋養(yǎng)層細(xì)胞的數(shù)量,結(jié)果表明,E2的參與增加了多核滋養(yǎng)層細(xì)胞的數(shù)量,而P4的參與則減少了多核滋養(yǎng)層細(xì)胞的數(shù)量,聯(lián)合使用組的結(jié)果顯示,E2的加入相對(duì)于對(duì)照組引起綿羊滋養(yǎng)層多核細(xì)胞數(shù)量的增加,而P4的加入相對(duì)于對(duì)照組則不同程度的引起滋養(yǎng)層多核細(xì)胞數(shù)量的減少,其結(jié)果與E2和P4單獨(dú)刺激的結(jié)果相一致。本研究證實(shí)了多核細(xì)胞的形成與 ELECs的參與有密切的關(guān)系,而且不同的激素環(huán)境對(duì)于絨毛膜滋養(yǎng)層多核細(xì)胞的數(shù)量均有影響,為今后探究多核細(xì)胞的形成機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S826
【部分圖文】：

插圖和附表清單??１．?圖１－１?子宮解剖結(jié)構(gòu)的比較?１??２．?圖１－２?不同物種胎盤的大體形態(tài)?２??３．?圖１－３不同合胞素及哺乳動(dòng)物胎盤結(jié)構(gòu)的多樣性?３??４．?圖１－４人胎盤屏障的微生理模型?４??５．?圖１－５?合胞體細(xì)

綿羊的胎盤結(jié)構(gòu)屬于子葉型胎盤，從微觀組織學(xué)結(jié)構(gòu)上屬于結(jié)締組織絨毛膜胎??盤，其最大的特點(diǎn)是在形成過程中包含有大約１００多個(gè)由滋養(yǎng)外胚層絨毛細(xì)胞和子??宮肉阜組成的胎盤瘤（見圖１－２）?ｗ。但是，其中一些滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞產(chǎn)生了分化，??形成兩個(gè)細(xì)胞核的滋養(yǎng)層細(xì)胞，它們稱為巨細(xì)胞或雙核滋養(yǎng)層細(xì)胞（ＴＢＣｓ），同時(shí)??它們?cè)谌焉锲诘牟煌�階段與子宮內(nèi)膜細(xì)胞融合［９］。合胞體由子宮上皮細(xì)胞與ＴＢＣｓ相??互融合產(chǎn)生雜交細(xì)胞團(tuán)，是哺乳動(dòng)物中的特有的結(jié)構(gòu)，其包含了母體細(xì)胞核和胚胎??來源的細(xì)胞核。合胞體（多核細(xì)胞團(tuán)）在母體子宮內(nèi)膜組織中大量存在，而在內(nèi)皮??絨膜胎盤和血絨膜胎盤卻沒有相同的現(xiàn)象。從功能的角度來看，合胞體能夠?qū)⒓に??和滋養(yǎng)層細(xì)胞蛋白轉(zhuǎn)移到母體循環(huán)中，妊娠相關(guān)糖蛋白可以在母體血清中檢測(cè)到，??并可以作為診斷的依據(jù)。??Ｄｉｆｆｕｓｅ?Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙ??｛ｅ．ｇ．?Ｈｏｒｓｅ，?Ｐｉｇ）?（ｅ．ｇ．?Ｃｏｗ，?Ｓｈｅｅｐ）??Ｚｏｎａｒｙ?Ｄｉｓｃｏｉｄａｌ??｛ｅ．ｇ．?Ｃａｔ

因?yàn)樵谄浒l(fā)育過程中，頻繁的發(fā)現(xiàn)許多胎盤發(fā)育的必須基因都是由ＥＲＶｓ衍生??的啟動(dòng)子來轉(zhuǎn)錄的［１４］。另外一些研究者認(rèn)為，ＥＲＶｓ基因己經(jīng)成為宿主的一部分。而??在靈長類，兔形類，嚙齒類動(dòng)物中同樣發(fā)現(xiàn)（見圖１－３），該宿主體內(nèi)ＥＲＶｓ編碼的??囊膜蛋白促進(jìn)了滋養(yǎng)層細(xì)胞之間的融合，在母胎界面形成了合胞體層［１５］。??ｍｏｔｈｅｒ?ｆｅｔｕｓ??Ｉ?一＾一?ｌａｇｏｍｏｒｐｈａ?麵?一??出?１?——Ｒｏｄｅｎｔｉａ?靈?ｓｙｎｃｙｕ’ｎ￣Ａ（ｍｄ＿８?—？?ＨＶ０ｆ？?ｈｅｍｏｃｈｏｒｉａｌ??．．?Ｐｒｉ＿?■—」１?；Ｓｙｎｃｙｔｉ〇ｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ??ｒ?Ｃａｒｎｉｖｏｒａ?讕—１?ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｃｈｏｒｉａｌ???一?Ｐｅｒｉｓｓｏｄａｃｔｙｌａ?Ｓ??一＾＾??Ｃｈｉｒｏｐｔｅｒａ?驪＿?ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ?ｔｒｉｎｕｃｌｅａｔｅ?ｃｅｌｌ??Ｅｕｔｈｅｒｉａｎ?（＿?ＭＭ＿?Ｒｕｍｉｎａｎｔｉａ?ｓｙｎｃｖｔｉｎ？?ｓｙｎｅｐｉｔｈｅｌｉｏｃｈｏｒｉａｌ??—ｌ［ｒ＾＿?Ｃｅｔａｃｅａ?ａ?丨霤團(tuán)？丨（ｒ—）??Ｉ?——Ｓｕｉｎａ?麗??—－?Ｉｎｓｅｃｔｉｖｏ丨ａ?ｈｉ?國，：．：ｊ?Ｉ?．＇纏＾??，?、?１?ｅｐｉｔｈｅｌｉｏｃｈｏｒｉａｌ??」——?Ａｆｒｏｔｈｅｒｉａ?誦＿?丨，。▼???－?Ｘｅｎａｆｔｈｒａ?國?１．?ｂｌｏｏｄｖｅｓｓｅｌ??ｕｔｅｒｉｎｅ?ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ?ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ??ｆ■…Ｔ…，．？，，，，，?““廣—
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2883327