發(fā)布時間：2018-03-11 18:08

  本文選題：束縛應(yīng)激　切入點：細(xì)胞凋亡　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：在畜牧生產(chǎn)中,抓捕、采血、運(yùn)輸、斷奶、分群、注射等操作程序均會引起家畜應(yīng)激反應(yīng),在一定程度上影響生長和生產(chǎn)。本試驗以家畜生產(chǎn)中常見抓捕或者限制活動過程中存在的束縛應(yīng)激小鼠模型為研究對象,研究其對雄鼠生殖活動的影響,分析應(yīng)激開始時期與雄鼠產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)系,并從睪丸組織形態(tài)病理學(xué)、生殖細(xì)胞凋亡、睪酮合成、精子發(fā)生、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路相關(guān)蛋白和線粒體凋亡信號通路等方面,闡明應(yīng)激導(dǎo)致小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡和生精功能障礙的機(jī)理。此外,還研究了4-苯基丁酸(PBA),Ghrelin(GHRL)和β-隱黃質(zhì)(CRY)三種化學(xué)物質(zhì)的抗應(yīng)激效果及其作用機(jī)制。研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1束縛應(yīng)激對初情期雄性小鼠生殖能力的影響目的:研究束縛應(yīng)激對初情期雄性小鼠生殖功能的影響。結(jié)果:與對照組相比,應(yīng)激組和恢復(fù)組的初情期小鼠體重、睪丸、附睪和精囊重量顯著降低,精子畸形率顯著升高,而睪丸、附睪和精囊相對重量均顯著升高。應(yīng)激顯著降低血清中睪酮水平,而經(jīng)過24h恢復(fù)后繼續(xù)降低。應(yīng)激顯著提高生殖細(xì)胞凋亡率,恢復(fù)24h后并沒有得到緩解。應(yīng)激組和恢復(fù)組睪丸StAR基因和睪酮合成相關(guān)基因3β-HSD和P450scc的mRNA表達(dá)水平較對照組相比顯著降低。結(jié)論:應(yīng)激對初情期小鼠精子發(fā)生和睪酮合成產(chǎn)生明顯的損傷作用,并且恢復(fù)24h并沒有緩解這種損害作用;應(yīng)激對初情期小鼠精子發(fā)生和睪酮合成的損害作用可能與睪丸StAR和睪酮合成酶基因表達(dá)降低以及生殖細(xì)胞凋亡有關(guān)。2應(yīng)激對成年雄性小鼠生殖能力的影響及其分子機(jī)制目的:研究成年雄性小鼠經(jīng)受束縛應(yīng)激對睪丸功能和精子發(fā)生的影響。結(jié)果:與對照組相比,應(yīng)激組和恢復(fù)組小鼠體重、睪丸和附睪重量顯著降低,精子畸形率顯著升高,而睪丸、附睪和精囊相對重量均顯著升高。應(yīng)激使小鼠睪丸發(fā)生明顯病變,恢復(fù)24h后并沒有得到緩解。應(yīng)激組和恢復(fù)組小鼠睪酮合成酶相關(guān)基因StAR、3β-HSD和P450scc的mRNA表達(dá)水平較對照組相比顯著下降。應(yīng)激顯著降低血清中睪酮水平,但恢復(fù)24h后顯著高于應(yīng)激組。應(yīng)激組和恢復(fù)組睪丸生殖細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,斷裂呈現(xiàn)多數(shù)小空泡狀,無規(guī)則排列于胞質(zhì),表明細(xì)胞發(fā)生了明顯的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。線粒體超微結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著的變化,應(yīng)激組和恢復(fù)組小鼠生殖細(xì)胞的線粒體基質(zhì)密度下降,嵴呈現(xiàn)不規(guī)則分布,多數(shù)線粒體出現(xiàn)殘缺。應(yīng)激顯著上調(diào)線粒體中bax蛋白表達(dá),下調(diào)cytc和bcl-2蛋白表水平,相反,應(yīng)激顯著上調(diào)胞質(zhì)中cytc和bax蛋白表達(dá)水平。束縛應(yīng)激顯著上調(diào)ers相關(guān)應(yīng)激蛋白xbp-1,p-jnk,chop,grp78和atf6的蛋白表達(dá)水平,而恢復(fù)24h后繼續(xù)上調(diào)并顯著高于應(yīng)激組。結(jié)論:應(yīng)激對成年小鼠精子發(fā)生和睪酮合成有明顯的損害作用,并且恢復(fù)24h并沒有緩解這種損害作用;應(yīng)激對成年期小鼠精子發(fā)生和睪酮合成的損害作用可能與睪丸star和睪酮合成酶表達(dá)降低以及生殖細(xì)胞凋亡有關(guān);應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞色素c釋放,激活胞質(zhì)中caspase3凋亡信號通路;束縛應(yīng)激誘導(dǎo)睪丸生殖細(xì)胞的凋亡可能是通過ers信號通路。3化學(xué)分子伴侶pba緩解束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠睪丸ers和生殖細(xì)胞凋亡目的:闡明ers介導(dǎo)的應(yīng)激小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡作用。結(jié)果:pba能夠抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)記grp78和chop蛋白表達(dá)水平;pba還能夠顯著抑制xbp-1和jnk的磷酸化水平;另外,pba還能下調(diào)atf6蛋白表達(dá)水平。pba顯著抑制束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠體重、睪丸和附睪重量的下降,能夠抑制束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的睪丸和附睪相對重量的上升。pba能夠緩解束縛應(yīng)激引發(fā)的生殖細(xì)胞凋亡。pba抑制應(yīng)激誘導(dǎo)的star、p450scc和3β-hsd基因mrna表達(dá)水平的上調(diào)。結(jié)論:pba能夠部分抑制ers誘導(dǎo)的小鼠睪丸內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和生殖細(xì)胞凋亡,同時抑制睪酮合成相關(guān)基因的表達(dá)下調(diào)。4ghrl抑制rs誘導(dǎo)的小鼠睪丸ers的效果及其機(jī)制目的:研究ghrl對rs誘導(dǎo)的小鼠睪丸ers的作用效果。結(jié)果:應(yīng)激組的體重、睪丸和附睪重量均顯著下降,而睪丸指數(shù)和附睪指數(shù)均顯著上升,而ghrl組的體重、睪丸和附睪的重量顯著高于應(yīng)激組。應(yīng)激組血清睪酮水平顯著降低,而ghrl組顯著高于應(yīng)激組血清睪酮水平。應(yīng)激組小鼠睪丸睪丸發(fā)生明顯病變。而ghrl組睪丸組織基本正常,睪丸組織曲細(xì)精管各種細(xì)胞排列緊密,形態(tài)正常。應(yīng)激組的睪丸生殖細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著增加,而ghrl組顯著低于應(yīng)激組。ghrl抑制應(yīng)激導(dǎo)致的睪酮合成酶相關(guān)基因的mrna表達(dá)水平下調(diào)�？梢燥@著抑制應(yīng)激誘導(dǎo)的睪丸xbp-1,chop,grp78和atf6mrna蛋白表達(dá)水平;而ghrl處理后,應(yīng)激誘導(dǎo)的xbp-1,p-jnk,chop,grp78和atf6mrna的表達(dá)顯著被抑制。結(jié)論:ghrl能夠顯著抑制小鼠睪丸er相關(guān)蛋白的表達(dá)和生殖細(xì)胞凋亡。5β-隱黃質(zhì)(cry)對小鼠睪丸支持細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究目的:研究β-隱黃質(zhì)對氧化應(yīng)激介導(dǎo)的大鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡的效果。結(jié)果:cry可以緩解cd誘導(dǎo)的睪丸的組織形態(tài)學(xué)變化和生殖細(xì)胞凋亡;cry處理顯著抑制cd誘導(dǎo)大鼠睪丸勻漿中t水平的降低;另外,cry處理抑制cd誘導(dǎo)睪丸脂質(zhì)過氧化物(lpo)和丙二醛(mda)水平升高,部分緩解鎘誘導(dǎo)的超氧化物歧化酶(sod),過氧化氫酶(cat)和谷胱甘肽(gsh)水平的降低。結(jié)論:cry可以緩解cd誘導(dǎo)的睪丸氧化應(yīng)激損傷和生殖細(xì)胞凋亡。6β-隱黃質(zhì)對小鼠支持細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究目的:研究cry對lps誘導(dǎo)小鼠睪丸支持細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用效果及其機(jī)制。結(jié)果:cry顯著抑制lps誘導(dǎo)細(xì)胞活力的下降和凋亡比例的升高。cry抑制lps誘導(dǎo)的炎性因子相關(guān)基因腫瘤壞死因子(tnf-α)、白細(xì)胞介素-10(il-10)、白細(xì)胞介素-6(il-6)和白細(xì)胞介素-1β(il-1β)表達(dá)上調(diào);同時,cry還能抑制lps誘導(dǎo)的支持細(xì)胞生精相關(guān)基因(ar,hsf2,creb,fshr,inhβb和abp)表達(dá)的下調(diào);另外,lps顯著提高睪丸支持細(xì)胞p-erk,pp38,pp65蛋白表達(dá)水平(p0.05),而cry處理顯著抑制lps誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)上調(diào)(p0.05)。結(jié)論:cry緩解lps誘導(dǎo)的睪丸支持細(xì)胞炎癥,mapk信號通路參與該反應(yīng)過程,因此cry可能成為一種抗炎癥的藥物。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn):(1)應(yīng)激對初情期和成年小鼠睪丸結(jié)構(gòu)和功能有明顯的損害作用,并且恢復(fù)24h并不能緩解這種損害作用;(2)應(yīng)激對初情期和成年小鼠精子發(fā)生和睪酮合成的損害作用可能與睪丸star和睪酮合成酶表達(dá)降低以及生殖細(xì)胞凋亡有關(guān);(3)ers信號通路和線粒體凋亡信號通路共同介導(dǎo)rs引發(fā)的小鼠睪丸生殖細(xì)胞的凋亡;(4)ghrl抑制束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的睪丸ers和生殖細(xì)胞凋亡;(5)pba能夠部分抑制束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的ers介導(dǎo)的睪丸生殖細(xì)胞凋亡和睪酮合成酶相關(guān)基因的表達(dá)下調(diào);(6)cry緩解提高cd誘導(dǎo)的大鼠睪丸組織氧化應(yīng)激和生殖細(xì)胞凋亡;(7)cry抑制脂多糖引發(fā)的炎癥反應(yīng),mapk參與cry抑制炎癥反應(yīng)過程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.3

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本文編號：1599305