發(fā)布時間：2018-03-10 11:13

  本文選題：雞　切入點：p　出處：《中國獸醫(yī)科學(xué)》2017年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為制備特異性的雞細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白p21單克隆抗體(mAb),利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)擴(kuò)增雞p21基因,將其克隆入原核表達(dá)載體pET-30a中,隨后轉(zhuǎn)化進(jìn)入BL21(DE3)中,利用異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離。切膠研磨,將收集的雞p21蛋白腹腔免疫BALB/c小鼠,三免后,選取抗體陽性的小鼠脾與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合并篩選單抗。結(jié)果顯示,經(jīng)亞克隆純化,共篩選獲得12株陽性雜交瘤細(xì)胞株,即1B12、1E12、1H7、2B5、2C5、2C8、2D8、2F2、3C11、3D6、3G7和4G6。利用間接免疫熒光(IFA)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和免疫印跡檢測單抗效價。成功制備了特異性雞p21單抗。這為進(jìn)一步研究雞p21生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to prepare a specific monoclonal antibody against cyclin dependent kinase inhibitor p21 (p21), chicken p21 gene was amplified by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and cloned into prokaryotic expression vector pET-30a. The expression was induced by isopropylthiogalactoside (IPTG) and separated by SDS- polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The collected chicken p21 protein was intraperitoneally immunized with BALB/c mice. The antibody positive mouse spleen was fused with mouse myeloma cell line SP2/0 and monoclonal antibody was screened. The results showed that 12 positive hybridoma cell lines were obtained by subclone purification. The specific monoclonal antibody p21 was successfully prepared by using indirect immunofluorescence (IFA), enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) and immunoblotting assay (Elisa) to study the biological function of chicken p21. The results showed that the specific monoclonal antibody of chicken p21 was prepared successfully by 1B12C, 1E12, 1H7, 2C5, 2C8, 2D8, 2F2, 3C11, 3D6, 3G7 and 4G6.The titer of specific monoclonal antibody against p21 was successfully prepared by indirect immunofluorescence (IFA), enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) and immunoblotting assay.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;
【基金】：國家自然基金面上項目(31472218) 江蘇省自然科學(xué)青年基金項目(BK20140711) 留學(xué)回國人員科研啟動基金項目(教外司留[2014]1685號) 中央高�；�本業(yè)務(wù)費(Y0201300526,Y0201300527) 江蘇省優(yōu)勢學(xué)科專項經(jīng)費
【分類號】：S831

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本文編號：1593089