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斑點熱群立克次體海南株的分離和鑒定

發(fā)布時間:2020-11-19 14:09
   斑點熱群立克次體(spotted fever group Rickttsia,SFGR)系引起斑點 熱的病原體,是立克次體屬中最復(fù)雜的一群!禕ergey's細菌學(xué)鑒定手冊》 第九版上收錄了8種斑點熱群立克次體,其中有5種對人具有致病性。 該立克次體與節(jié)肢動物關(guān)系密切,世界各地都有發(fā)生。近年來,由于人 們社會活動的增加、全球化貿(mào)易活動的進行、旅游業(yè)的發(fā)展等,導(dǎo)致斑 點熱發(fā)病率上升、新的病原體出現(xiàn),原有疾病的情況及分布也發(fā)生了變 化。世界各地又陸續(xù)分離到10余種致病或不致病的SFGR,它們都被認 為是斑點熱群新種,其中包括我國分離的黑龍江立克次體及內(nèi)蒙古立克 次體。我國自1962年從黑龍江東方田鼠分離到第一株斑點熱群立克次體 (虎林84)以來,已經(jīng)從不同地區(qū)的媒介蜱和嚙齒動物以及斑點熱患者 中分離到多株斑點熱群立克次體,但多在北方地區(qū),故一直以來人們認 為南方?jīng)]有斑點熱。1986年日本內(nèi)田孝宏在日本四國地區(qū)分離出一株日 本斑點熱立克次體,為斑點熱群立克次體的一個新種,而海南島的自然 景觀與四國相似,其生態(tài)環(huán)境都非常有利于媒介昆蟲的繁殖,是否也有 日本斑點熱立克次體(R.japonica)或其他立克次體感染的存在?為探明 海南島立克次體,尤其是斑點熱立克次體的感染情況,我們于1990年及 1993年分別在海南島各地采樣開展立克次體血清學(xué)和病原學(xué)的調(diào)查研 究。1990年自海南島東南部(保亭縣)、中南部(通什市)和北部(海 口市)采取了 642份當(dāng)?shù)蒯t(yī)院診斷為非立克次體病的患者血清及 37份疑 似立克次體感染的患者血清,應(yīng)用微量間接免疫熒光法帥 FA)進行了 人群血清日本斑點熱門.japonica人 鼠型斑疹傷寒立克次體皈.tyPhi) 抗體調(diào)查。調(diào)查結(jié)果,只有2份血清含有高滴度日本立克次體抗體(滴 度 31:160人提示海南島日本斑點熱立克次體感染罕見。但是,從海南 島東南部和中南部地區(qū)(五指山周邊區(qū))的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn),在斑 疹傷寒 IgG抗體陽性的人群血清中,40%有斑疹傷寒立克次體 lgM抗體 (滴度 31:80人 在當(dāng)?shù)匾伤屏⒖舜误w感染的患者血清中,約半數(shù)含有 高滴度斑疹傷寒立克次體 IgMI gG抗體(滴度均> 1:16 0人表明在門診 患者中有漏診的斑疹傷寒現(xiàn)癥病人或新近感染過斑疹傷寒的患者,在疑 似克次伸感染的患者中斑疹傷寒的感染相當(dāng)嚴重。 基于以上情況,我們又于1993年自海南島的東、南、西、北、中部 選點采集了561份各醫(yī)院診斷為非立克次體病的患者血清標(biāo)本,應(yīng)用 mIM進行了斑點熱、流行性斑疹傷寒和恙蟲病立克次體抗體調(diào)查。調(diào)查 結(jié)果,血清 IgG 抗體的陽性率分別為:斑點熱立克次體 30.830(164/532),流行性斑疹傷寒立克次體 18.770(101/538),恙蟲病 立克次體13.55叭76巧61入結(jié)果表明海南島有多種立克次體。ò唿c熱、 斑疹傷寒、恙蟲。┐嬖,其地理分布較廣,主要在山區(qū)和丘陵地帶(瓊 中縣、大豐農(nóng)場、循州市、通什市、保亭縣等五指山周邊區(qū)人平原和濱 海城市(?谑小⑷齺喪校┹^少。本調(diào)查首次發(fā)現(xiàn)海南島有斑點熱感染 存在,修正了過去認為我國南方?jīng)]有斑點熱的觀點。 斑點熱群立克次體如同其他立克次體一樣,是專性話細胞內(nèi)寄生的微 生物,通常人們用動物(豚鼠)和雞胚進行立克次體的分離及傳代培養(yǎng), 且標(biāo)本多來自媒介昆蟲或動物。我們根據(jù)國外的相關(guān)報道,采用L929(鼠 纖維母細胞株)和V盯。H洲綠猴腎上皮細胞株)單層細胞培養(yǎng)法直接 從患者血液中分離立克次體,這在國內(nèi)尚屬首次。30份疑似立克次體病 或不明熱患者全血或血塊標(biāo)本中,先后共分離出 19株立克次體,經(jīng) ml FA、 多聚酶鏈反應(yīng)uCR)鑒定 11株是斑點熱群立克次體,4株是斑疹傷寒 立克次體,4株是恙蟲病立克次體。 PCR由于能在體外將特異性DNA序列進行高效擴增,為病原體的分型 2 提供了有力手段,目前已成為新的分類鑒定和診斷SFGR的方法。因PCR 法非常敏感,標(biāo)本中有2個個立克次體即可檢出,故可用于SFGR的快速、 早期診斷。 分于量為190kD蛋白基因是斑點熱群立克次體特有的基因* 年, Regnery首次根據(jù)立氏立克次體分子量為190kD蛋臼基因b呷A)設(shè)計 的 Rr190.70p不 Rrl90*02n一對引物用于擴增 SFGR o呷A的 ORF起始 部位 532 hp大小的基因片段,繼之用限制性內(nèi)切酶長度多肽性圖譜法 oCR/RFLP)區(qū)別SFGR。由于該法具有快速。簡便、特異等優(yōu)點,目 前已被廣泛用于SFGR新種的鑒定。我們對20例疑似立克次體感染或不 明熱患者的血液標(biāo)本經(jīng) L929細胞分離培養(yǎng),共分離出 12株立克次體, 將這 12株立克次體的分離培養(yǎng)物用 Rr190.70p和 Rr190.602n這一對引 物進行 PCR檢測,結(jié)果檢出 7株為斑點熱群立克次體。對 10例疑似立 克次體感染或不明熱患者的血液標(biāo)本先用立克次體屬(恙蟲病立克次體 除外)PCR引物對RpCS877p。RpCS1258n檢壩,結(jié)果7例卜性。將這 7例陽性血液標(biāo)本接種Vero細胞分離培養(yǎng),均分離出立克次體。這7株 立克次體
【學(xué)位單位】:江西醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位年份】:2001
【中圖分類】:R376
【文章目錄】:
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 前言
四、 材料與方法
五、 結(jié)果
六、 討論
七、 小結(jié)
八、 致謝
九、 參考文獻
十、 個人簡歷
十一、 綜述

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