發(fā)布時(shí)間：2020-12-10 13:38

　　目的：本研究主要對(duì)病毒基因來(lái)源的人趨化因子同源物vMIP-Ⅱ在原核細(xì)胞的表達(dá)及純化條件進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)其活性進(jìn)行鑒定，為大量獲取單鏈vMIP-Ⅱ和將其用于趨化因子受體封閉因子的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。 方法：本實(shí)驗(yàn)對(duì)已克隆轉(zhuǎn)化的菌株進(jìn)行誘導(dǎo)，并用Amylose resin親和純化目的蛋白，再經(jīng)SDS-PAGE和Western blot分析純化結(jié)果，以Transwell趨化小室和FN包被的96孔板對(duì)vMIP-Ⅱ的生物學(xué)活性進(jìn)行鑒定。用MTT法檢測(cè)vMIP-Ⅱ?qū)ν庵苎獑蝹�(gè)核細(xì)胞的毒性及對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果：vMIP-Ⅱ／MBP融合蛋白在大腸桿菌中呈高效分泌型表達(dá)，SDS-PAEG可見(jiàn)在54KD位置有一明顯的誘導(dǎo)表達(dá)條帶。最佳誘導(dǎo)條件為：TB培養(yǎng)基、0.3mmol／L IPTG、28℃誘導(dǎo)4h。免疫印記結(jié)果顯示在54KD位置有一明顯的藍(lán)染條帶。該菌的最佳純化條件為：30％的P₂緩沖液，MgSO₄用量為50ml／g濕菌，濃度為5mmol／L。該法獲得的融合蛋白酶切后得到的單體活性較高，對(duì)PBMC趨化、黏附特性的抑制率達(dá)50％以上。vMIP-Ⅱ... 

【文章來(lái)源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MBP融合蛋白親和層析

圖5vMIP一11免疫印記和純化條件的優(yōu)化gSO;對(duì)細(xì)胞破碎及純化的影響6所示，隨著所用MgS04體積的增加mUg濕菌Mgso;破碎體積水平濃度圖7)，故上清雜蛋白濃度較高可能與，親和層析所得融合蛋白的量較低，有關(guān)。表1不同體積MgSO;不同體積Mgso

PBMC吉姆薩染色形態(tài)觀察

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]分子伴侶的多重功能[J]. 俞峻,馬康濤.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 1998(02)
[2]外源基因在大腸桿菌中表達(dá)的研究進(jìn)展[J]. 龍建銀,王會(huì)信.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 1997(02)



本文編號(hào)：2908789