病毒性肝炎是我國的常見、多發(fā)病,其中乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染是導致肝細胞癌的主要危險因子之一。乙型肝炎病毒變異性高,其基因組包括四個開放閱讀框(C、P、S、X),其中HBx編碼的蛋白是一種多功能性蛋白,為病毒基因組轉(zhuǎn)錄所必需,在乙型肝炎病毒的復制、細胞生長、DNA修復及凋亡過程中起重要作用。因此,對HBx進行深入研究具有極其重要的理論和臨床意義。 細胞毒性T淋巴細胞是細胞免疫應答的核心成分,通過受體與帶有CTL表位即抗原肽的MHC-I類分子互相作用,溶解、殺傷靶細胞。抗原肽是抗原中能被免疫細胞特異性識別的線性片段或空間構象性結構,是引起免疫應答和免疫反應的基本單位,在機體免疫中發(fā)揮關鍵的作用,抗原表位的選擇也是能否獲得特異性抗體的關鍵。由于HBx表位可以被不同的MHC-Ⅰ類分子所識別、遞呈,在這些MHC-Ⅰ類分子中,中國人群中HLA-A2陽性的人群高達50%,因此對HLA-A0201限制性的CTL表位進行研究具有更大的現(xiàn)實意義。 迄今為止,HBV被分為八個不同的基因型(A-H),以及眾多的血清型。我們選擇了中國人群中最常見B基因型中的adw血清型和C基因型中的adr血清型的基因序列作為研究對象,分別通過三個提供表位預測服務的網(wǎng)絡站點,以及超基序、延展基序和量化基序等方案預測獲得4條九肽作為候選表位(HBx1:VLCLRPVGA、HBx2:CLFKDWEEL、HBx3:VLHKRTLGL、HBx4:HLSLRGLPV)。由于預測結合并不等于實際結合,并且實際結合也并不意味著真正具有免疫原性,所以有必要通過體內(nèi)、體外實驗對預測表位的結合能力、免疫原性進行進一步的免疫學鑒定。為此,我們根據(jù)文獻分別選擇了陽性肽(HBc:FLPSDFFPSI)以及陰性肽(HBc,HLA-A2402:EYLVSFGVW)作為陽性、陰性參照。 T2細胞作為一種免疫學研究的工具,其表面空載的HLA-A0201分子表達極不穩(wěn)定,而外源性抗原肽的結合能夠提高HLA-A0201分子的穩(wěn)定性,因此我們通過T2細胞結合實驗和結合穩(wěn)定性實驗檢測各候選表位與HLA-A0201分子結合的親和力、穩(wěn)定性,四條候選表位中HBx2的親和力和穩(wěn)定性最高。 為了進一步檢測各候選表位在體內(nèi)環(huán)境中的免疫原性,我們以HLA-A2.1/kb轉(zhuǎn)基因鼠為模型,模擬體內(nèi)環(huán)境,對四條候選表位刺激脾細胞釋放IFN-γ的能力和誘導的肽特異性CTL的細胞殺傷能力進行了檢測,四條候選表位中HBx2同樣表現(xiàn)出較高的刺激脾細胞釋放IFN-γ和誘導的肽特異性CTL的細胞殺傷的能力。之后我們分離了HLA-A0201陽性慢性活動期乙肝病人外周血中的單個核細胞,通過檢測HBx2和各對照肽體外刺激單個核細胞分泌IFN-γ的能力和誘導的肽特異性CTL的細胞殺傷能力,對HBx2的免疫原性作進一步的鑒定。根據(jù)體內(nèi)、體外鑒定的結果,我們利用HBx2構建了可溶性的肽-四聚體,為將該表位進一步應用于臨床診斷和治療鋪平了道路。 綜上所述,HBx2(CLFKDWEEL)是一個潛在的HBx來源的HLA-A0201限制性CTL表位,具備應用于臨床診斷、治療的可能性。我們的研究為進一步深入探討HBx在乙肝和乙肝導致的肝細胞癌中的作用以及慢性乙肝、肝細胞癌的診斷、治療研究打下了良好的基礎。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R373

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 ;Hepatitis B Virus Down-Regulates Expressions of MHC Class I Molecules on Hepatoplastoma Cell Line[J];Cellular & Molecular Immunology;2006年05期

2 董海龍,隋延仿,葉菁,李增山,曲萍,張秀敏,陳廣生,祿韶英;腫瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性細胞毒性T細胞表位的預測及合成鑒定[J];中華醫(yī)學雜志;2003年12期

3 ;Expression of nuclear factor-KB in hepatocellular carcinoma and its relation with the X protein of hepatitis B virus[J];World Journal of Gastroenterology;2001年03期

本文編號：2026876