去端肽Ⅰ型膠原蛋白的免疫原性研究
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?C端肽標(biāo)準(zhǔn)品，上海廣銳生物科技有限公司提供，批號(hào)：201608；牛Ⅰ型膠原N端肽標(biāo)準(zhǔn)品，上海廣銳生物科技有限公司提供，批號(hào)：201608。去端肽Ⅰ型膠原蛋白為白色或淡黃色海綿狀固體。膠原蛋白海綿具有網(wǎng)狀多孔支架結(jié)構(gòu)，在掃描電鏡下觀察到膠原海綿表面呈纖維狀，見圖2所示，其孔徑大小在500nm以內(nèi)；在透射電鏡下觀察膠原蛋白海綿纖維結(jié)構(gòu)，200nm條件下可清晰地看到膠原纖維形態(tài)上呈現(xiàn)“橫紋帶或橫紋褶皺”，見圖3中箭頭所示，而這橫紋帶或橫紋褶皺正是Ⅰ型膠原三螺旋纖維的典型表現(xiàn)[8-9]。圖1Ⅰ型膠原蛋白三螺旋結(jié)構(gòu)Figure1Triple-helicalstructureoftypeIcollagen
量濃度分別為0.016，0.03125，0.0625，0.125，0.25，0.5，1，2，4mg/L的Gal-牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品。將裂解好的樣本和標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本分別與等體積抗α-Gal抗體反應(yīng)，靜置、離心后，取適當(dāng)上清液與固相抗原反應(yīng)，依照ELISA法對(duì)樣本殘留的抗α-Gal抗體進(jìn)行檢測。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布數(shù)據(jù)用x_±s表示，將數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。當(dāng)P≤0.01時(shí)表示差異有非常顯著性意義，當(dāng)P≤0.05時(shí)表示差異有顯著性意義。圖2掃描電鏡下膠原蛋白海綿三維多孔網(wǎng)狀支架結(jié)構(gòu)Figure2Three-dimensionalporousreticularscaffoldstructureofcollagenspongeunderelectronmicroscope圖注：可清晰地看到膠原纖維形態(tài)上呈現(xiàn)“橫紋帶或橫紋褶皺”，見箭頭所示。圖3艾瑞金膠原蛋白海綿200nm條件下透射電子顯微鏡圖片(×26500)Figure3TransmissionelectronmicroscoperesultofErigincollagenspongeat200nm(×26500)44
值，t檢驗(yàn)結(jié)果顯示3組樣品吸光度值比較差異無顯著性意義(P>0.05)。依據(jù)測試結(jié)果，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其方程式為其方程式為y=0.152x+0.191(R2=0.97)，然后將樣品的吸光度值代入回歸方程，得到端N端肽濃度。從表4可看出，3個(gè)批次的去端肽Ⅰ型膠原蛋白均未檢出膠原N端肽，說明樣品中膠原N端肽濃度明顯低于試劑盒270kD180kD90kDγβα1α2圖4去端肽Ⅰ型膠原蛋白電泳圖譜Figure4ElectrophoresisoftypeIatelocollagen表1去端肽Ⅰ型膠原蛋白C端肽吸光度檢測結(jié)果Table1AbsorbancevalueofC-terminaltelopeptideintypeIatelocollagen組別吸光度值組別吸光度值組別吸光度值A(chǔ)10.045B11.208C10.120A20.044B20.795C20.099A32.886B30.712C30.081A42.850B40.429C40.095A52.399B50.424C50.106A62.421B60.129C60.109A71.222B70.095C70.108表注：A1、A2為空白對(duì)照孔檢測結(jié)果；A3-B5為標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果；B6、B7、C1為批號(hào)20160503去端肽Ⅰ型膠原蛋白檢測結(jié)果；C2、C3、C4為批號(hào)20160419去端肽Ⅰ型膠原蛋白檢測結(jié)果；C5、C6、C7為批號(hào)20160513去端肽Ⅰ型膠原蛋白檢測結(jié)果。表2去端肽Ⅰ型膠原蛋白C端肽濃度檢測結(jié)果(nmol/L)Table2ConcentrationofC-terminaltelopeptideintypeIatelocollagen組別C端肽濃度組別C端肽濃度組別C端肽濃度A1-B131.37C1-A2-B218.76C2-A382.540B316.23C3-A481.45B47.61C4-A567.70B57.53C5-A668.35B6-C6-A731.78B7-C7-表注：A1、A2為空白對(duì)照孔檢測結(jié)果；A3-B5為標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果；B6、B7、C1為批號(hào)201
【參考文獻(xiàn)】
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【共引文獻(xiàn)】
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