中國心腦血管患病及死亡率逐年攀升,占居民疾病死亡構(gòu)成的40%,住院總費用每年超過千億。建立以患者為中心,以高血壓、血脂異常等危險因素管理為突破口的全程綜合防治管理模式,是開展重大心腦血管疾病一級預防的關(guān)鍵。單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)已廣泛用于疾病診斷、疾病易感性評估、藥物遺傳學分析等領(lǐng)域。常用SNP檢測技術(shù)包括測序、實時熒光PCR、DNA芯片雜交、質(zhì)譜等,可為臨床提供準確的基因檢測結(jié)果,但須依賴昂貴的設備、專業(yè)的人員,操作步驟繁瑣,檢驗結(jié)果回報時間(Turn-Around Time,TAT)長,因而在資源有限的實驗室普及應用受到一定限制。為此,亟需開發(fā)快速準確、操作簡單、性價比高的分子診斷適宜技術(shù),可應用各級醫(yī)療機構(gòu)、基礎(chǔ)臨床實驗室、疾控中心等多種場合,特別是可利于對大規(guī)模人群進行風險基因的快速篩查,以及時干預心腦血管慢性疾病,實現(xiàn)個性化預防和治療。2007年起,側(cè)向流層析技術(shù)(Lateral Flow Assay,LFA)被用于SNP檢測領(lǐng)域。通過LFA裝置對等位基因特異性產(chǎn)物分析,可快速讀取基因型結(jié)果。與已有SNP檢測方法...

【文章頁數(shù)】：158 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1免疫層析試紙條結(jié)構(gòu)及層析技術(shù)原理示意圖

西北大學博士學位論文2據(jù)雙抗體夾心法或競爭法，可有不同的實現(xiàn)模式，如圖1-1所示。層析過程中，通過毛細管作用，滴加在樣品墊上的待檢樣品被運送至結(jié)合墊，與標記材料結(jié)合，通過液體層析被共同帶往硝酸纖維素膜，與預先包被在檢測線與質(zhì)控線處的受體發(fā)生特異性結(jié)合反應，10min左右反應時間，....

圖1-2引物延伸反應結(jié)合LFA試紙條進行SNP基因分型的示意圖[23]

生成等位基因特異性產(chǎn)物。Loannis等[23,24]的研究中，所設計的特異性引物5’端帶有一段Poly(dA)，并在引物延伸反應的過程中，摻入帶有生物素（Bio）標記的dUTP，使得PEXT后得到的等位基因特異性產(chǎn)物能夠被LFA試紙條檢測。使用LFA試紙條進行分析時，等位基因特....

圖1-3寡核苷酸連接反應結(jié)合LFA試紙條進行SNP基因分型的示意圖[25]

西北大學博士學位論文4金納米顆粒表面poly(dT)雜交，然后另一端的生物素被固定在檢測線（T線）處的鏈親和素所捕獲，產(chǎn)生紅色條帶。多余的金納米顆粒被固定在質(zhì)控線的poly(dA)所捕獲，作為LFA試紙條的質(zhì)控。通過T線處紅色條帶的有無，判讀基因分型結(jié)果。圖1-3寡核苷酸連接反應....

圖1-4等位基因特異性雜交結(jié)合LFA試紙條進行SNP基因分型的示意圖[28]

西北大學博士學位論文4金納米顆粒表面poly(dT)雜交，然后另一端的生物素被固定在檢測線（T線）處的鏈親和素所捕獲，產(chǎn)生紅色條帶。多余的金納米顆粒被固定在質(zhì)控線的poly(dA)所捕獲，作為LFA試紙條的質(zhì)控。通過T線處紅色條帶的有無，判讀基因分型結(jié)果。圖1-3寡核苷酸連接反應....

本文編號：4001546