發(fā)布時(shí)間：2020-11-23 14:07

　　 阿爾茨海默癥(AD)是引起中老年人癡呆最常見(jiàn)的疾病。目前治療AD的藥物主要為乙酰膽堿酯酶抑制劑(AChEI)。建立快速地從天然產(chǎn)物中篩選AChEI的方法,將對(duì)臨床治療AD產(chǎn)生積極的作用。該研究建立了一種簡(jiǎn)單可靠的AChEI篩選新方法。通過(guò)海美溴銨在毛細(xì)管內(nèi)壁形成一段正電荷涂層,再經(jīng)過(guò)離子吸附作用制備1.5 cm長(zhǎng)的乙酰膽堿酯酶(AChE)反應(yīng)器。底物碘化乙酰硫代膽堿在0.015 MPa壓力下進(jìn)樣10 s,在微酶反應(yīng)器中停留1 min后采用毛細(xì)管電泳(CE)法對(duì)底物和酶解產(chǎn)物進(jìn)行分離。天麻素是天麻的重要藥效成分之一,對(duì)AChE具有抑制作用。該研究以天麻素為例,根據(jù)加入藥物前后酶解產(chǎn)物峰面積的差異,完成天麻素對(duì)AChE活性的抑制能力的測(cè)定。結(jié)果表明,隨著天麻素濃度的增加,產(chǎn)物峰面積逐漸減小,對(duì)AChE的活性抑制變大。該方法所建微酶反應(yīng)器產(chǎn)物峰面積的RSD值小于5.3%,可連續(xù)使用300次。當(dāng)天麻素濃度為5.24μmol/L時(shí),對(duì)AChE活性抑制率達(dá)到64.8%。根據(jù)加入不同濃度天麻素時(shí)的抑制率,測(cè)定出天麻素的IC_(50)值為(2.26±0.14)μmol/L(R~2=0.998 3)。與傳統(tǒng)紫外分光光度法所得結(jié)果(2.09±0.18)μmol/L吻合較好。固定化酶微反應(yīng)器的活性變差時(shí),可以洗脫掉固定在柱上的AChE,重復(fù)酶的固定化步驟即可完成再生。該方法簡(jiǎn)單、高效,運(yùn)行成本低,柱上固定的AChE酶反應(yīng)器穩(wěn)定性較好,可重復(fù)使用,極大地提高了工作效率,未來(lái)有望應(yīng)用于各類(lèi)AChEI的高通量篩選,對(duì)AD藥物的研發(fā)具有積極作用。
【部分圖文】：

熔融石英毛細(xì)管的內(nèi)表面由于硅烷醇基團(tuán)的電離而帶有負(fù)電荷,AChE也帶有負(fù)電荷。因此,必須通過(guò)具有強(qiáng)陽(yáng)離子基團(tuán)的水溶性電解質(zhì)或聚合物來(lái)改性毛細(xì)管壁內(nèi)壁,使其附著上正電荷,以制備固定化酶微反應(yīng)器(見(jiàn)圖1)。本研究采用0.1% HBD溶液進(jìn)行內(nèi)壁改性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HBD改性得到的正電荷涂層足夠穩(wěn)定,可以承受運(yùn)行緩沖液的多次沖洗。此外,帶正電荷的涂層可以產(chǎn)生恒定的反向電滲流,可加速帶負(fù)電荷分析物的遷移速度,實(shí)現(xiàn)更為快速的分離;涂層前后中性標(biāo)記物N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的出峰時(shí)間由5 min延長(zhǎng)至10 min,可知毛細(xì)管內(nèi)壁正電荷改性成功。
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