發(fā)布時間：2020-11-22 09:14

　　 目的本研究通過觀察補腎活血方預(yù)治療對高齡卵巢儲備功能下降小鼠促排卵后卵泡發(fā)育以及ERK信號的作用,為中醫(yī)藥改善高齡不孕患者的卵泡發(fā)育和生殖功能等方面提供理論依據(jù)。方法本研究隨機(jī)抽取30只年輕小鼠(40日齡),作為年輕空白對照組,將實驗的60只老齡小鼠(11月齡)再隨機(jī)分為兩組:老齡空白對照組與補腎活血方組,每組各30只。根據(jù)人、小鼠的體表面積換算法,補腎活血方組將方藥的每日成人服用劑量轉(zhuǎn)算為小鼠的每日給藥劑量,其灌胃藥量為每10g體重予0.2ml藥液量,每日下午1次。年輕空白對照組與老齡空白對照組分別灌等體積的自來水入胃,共給藥14天。灌胃結(jié)束后予注射用尿促性腺激素10U/只,36h后各組小鼠隨機(jī)取其中20只小鼠的卵巢,經(jīng)HE染色后鏡下觀察小鼠卵母細(xì)胞的發(fā)育情況;免疫熒光染色檢測小鼠卵泡顆粒細(xì)胞Ki67表達(dá)水平來觀察顆粒細(xì)胞增殖以及通過免疫印跡法檢測小鼠卵巢的ERK及p-ERK蛋白水平。注射尿促性腺激素48h后,給予每組剩余10只小鼠注射人絨毛膜促性腺激素20U/只,14 h后斷頸處死小鼠,于輸卵管壺腹部取出卵巢所排出的卵子,計算比較各組小鼠排卵的數(shù)目差異并經(jīng)免疫熒光染色檢測小鼠卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67表達(dá)水平來觀察顆粒細(xì)胞增殖。結(jié)果(1)補腎活血方對高齡卵巢儲備功能下降小鼠促排后排卵的影響年輕空白對照組小鼠促排后排出卵子的平均數(shù)目為28.20±2.92(??±s);老齡空白對照組小鼠促排后排出卵子的平均數(shù)目為4.45±1.94;補腎活血方組小鼠促排后排出卵子的平均數(shù)目為11.3±3.13。其中老齡空白對照組與年輕空白對照組比較,小鼠促排后排出的卵子數(shù)目明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);而補腎活血方組與老齡空白對照組比較,排出的卵子數(shù)目增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。(2)補腎活血方對高齡卵巢儲備功能下降小鼠卵泡發(fā)育的影響老齡空白對照組與年輕空白對照組比較,促排后鏡下可見小鼠卵巢內(nèi)竇卵泡數(shù)及正常次級卵泡數(shù)明顯減少(P0.01);而補腎活血方組與老齡空白對照組比較,竇卵泡數(shù)及正常次級卵泡數(shù)增加明顯(P0.05)。(3)補腎活血方對高齡卵巢儲備功能下降小鼠卵泡顆粒細(xì)胞及卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞增殖的影響年輕空白對照組小鼠卵泡顆粒細(xì)胞Ki67平均陽性率為90.11±3.55(??±s),卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67的平均陽性率為93.19±2.16;老齡空白對照組小鼠卵泡顆粒細(xì)胞Ki67平均陽性率為35.30±3.03,卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67的平均陽性率為33.07±3.76;補腎活血方組小鼠卵泡顆粒細(xì)胞Ki67平均陽性率為64.01±3.35,卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67的平均陽性率為66.84±3.09。老齡空白對照組與年輕空白對照組比較,小鼠卵泡顆粒細(xì)胞及卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.01);而補腎活血方組與老齡空白對照組比較,Ki67蛋白表達(dá)水平增加明顯(P0.01)。(4)補腎活血方對高齡卵巢儲備功能下降小鼠卵母細(xì)胞ERK1/2的激活作用三組實驗小鼠卵巢均有ERK1/2蛋白的表達(dá),且表達(dá)的水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。三組亦均有磷酸化ERK1/2蛋白的表達(dá),其中老齡空白對照組與年輕空白對照組比較,小鼠卵巢磷酸化ERK1/2蛋白相對表達(dá)量降低明顯(P0.01);而補腎活血方組與老齡空白對照組比較,小鼠卵巢磷酸化ERK1/2蛋白相對表達(dá)量增加明顯(P0.05)。結(jié)論(1)高齡卵巢儲備功能下降小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育障礙,卵泡顆粒細(xì)胞及卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞的增殖能力下降。(2)補腎活血方可改善高齡卵巢儲備功能下降小鼠卵泡發(fā)育,提高卵泡顆粒細(xì)胞及卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞的增殖能力。(3)補腎活血方能使老年小鼠卵巢組織p-ERK1/2蛋白水平增高,提示該中藥方能夠促進(jìn)高齡卵巢儲備功能下降小鼠卵巢ERK1/2蛋白的激活。(4)補腎活血方改善年齡相關(guān)卵巢儲備功能下降小鼠卵泡發(fā)育的作用機(jī)制可能與促進(jìn)小鼠卵泡顆粒細(xì)胞的增殖和ERK1/2磷酸化的激活有關(guān)。
【學(xué)位單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

A.年輕空白對照組 B.老齡空白對照組 C.補腎活血方組圖 1. 三組小鼠促排后卵巢排出的卵子Fig 1 Eggs of three groups that were excreted by ovaries after ovulation

A.年輕空白對照組 B.老齡空白對照組 C.補腎活血方組圖 3. 三組小鼠卵巢細(xì)胞的 HE 切片染色Fig 3 The morphological changes of cells in mouse ovaries were observed by Hstaining

<0.01）；而補腎活血方組與老齡空白對照組比較，排出的卵子數(shù)目增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P <0.01）。3.2 HE 染色觀察各組小鼠各級卵泡的形態(tài)學(xué)改變A.年輕空白對照組 B.老齡空白對照組 C.補腎活血方組圖 3. 三組小鼠卵巢細(xì)胞的 HE 切片染色Fig 3 The morphological changes of cells in mouse ovaries were observed by Hstaining
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 佟雅婧;補腎活血法治療排卵障礙性不孕系統(tǒng)評價再評價及子代發(fā)育臨床研究[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2018年

本文編號：2894468