目的確認芪丹地黃湯對DM大鼠的腎功能保護作用;確認芪丹地黃湯對DN大鼠腎臟結(jié)構(gòu)的影響;研究芪丹地黃湯對DN大鼠腎臟纖維化的影響;研究芪丹地黃湯對系膜細胞和成纖維細胞纖維化的影響,并探索其機制;確認芪丹地黃湯對DN大鼠腎臟RAS的影響。方法雄性SD大鼠隨機分為正常組和造模組,分別予以腹腔注射枸櫞酸鈉緩沖液和枸櫞酸鈉STZ緩沖液。1周后檢測血糖并納入空腹血糖16.67的大鼠進行后續(xù)實驗。將造模成功的大鼠隨機分為芪丹地黃湯組、氯沙坦組和模型組。分別于給藥后0、2、4、6、8周檢測血糖和體重。給藥后0、4、8周利用大鼠代謝籠收集大鼠24h尿液,記錄尿量(U-vol),并檢測24h尿蛋白(24hU-Pro)、尿素氮(BUN)。檢測給藥后8周的血肌酐(Scr)和24h白蛋白尿(24h MAU)。稱取腎臟重量,計算腎臟與體重之比(KW/BW);取部分腎臟組織,分別進行HE,PAS和Masson病理染色;取部分腎臟組織,免疫組化方法分析腎臟中α-SMA、TGF-β1表達;Western blot分析α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)、膠原-Ⅰ(COL-Ⅰ)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)在腎臟中的表達情況;藥物血清制備:芪丹地黃湯經(jīng)水煎、過濾、濃縮后保存;SD大鼠30只,隨機分為正常組、氯沙坦組、芪丹地黃湯組,每組10只,分別給予氯沙坦和芪丹地黃湯灌胃,對照組給予等量溶媒灌胃。給藥3d后下腔靜脈取血,分離血清,滅活、過濾,-80℃保存?zhèn)溆�。小鼠系膜細胞的培干預和檢測:系膜細胞和NRK-49F細胞饑餓12h后,分為對照組、高糖組,高糖+氯沙坦血清組、高糖+芪丹地黃湯血清組。藥物刺激48h后,檢測MTT法細胞增殖,Western blot檢測細胞FN、α-SMA、TGF-β1、TNF-α和RAS中的腎素(renin)、血管緊張素ⅡI受體1(AT1)和腎素/腎素原受體(PRR)的表達情況;Western blot檢測DN大鼠中renin、PRR、AT1的表達情況。結(jié)果給藥8周后,芪丹地黃湯組大鼠的血糖與模型組和氯沙坦組的比較無顯著性差異;芪丹地黃湯不會影響DN大鼠的體重和U-vol,也沒有顯著改善大鼠的BUN和KW/BW。但是芪丹地黃湯可顯著降低DN大鼠的24h MAU、24hU-Pro和Scr;給藥8周后,DN大鼠腎臟HE,PAS和Masson染色均可見芪丹地黃湯組和氯沙坦組的DN大鼠腎組織病理結(jié)構(gòu)改善,膠原和糖原沉積減少;免疫組化分析則顯示,給藥8周后,芪丹地黃湯可以抑制α-SMA和TGF-β1在腎小球中的表達。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn),芪丹地黃湯組DN大鼠腎臟中TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ、TNF-α的蛋白表達降低;含有芪丹地黃湯的藥物血清抑制系膜細胞和NRK-49F細胞的增殖率,同時可以降低系膜細胞和NRK-49F細胞中FN、α-SMA、TGF-β1、TNF-α 和 RAS 級聯(lián)中 renin、PRR、AT1 的表達;給藥8周后,芪丹地黃湯能夠抑制DN大鼠腎臟RAS級聯(lián)中renin、PRR和AT1的表達。結(jié)論芪丹地黃湯可以改善DN的腎功能和組織結(jié)構(gòu),可以抑制其纖維化,且這些積極作用,可能與抑制RAS有關(guān)。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

ＴＧＦ－Ｐ，的表達，而阻斷Ａｎｇｌｌ的活性，可顯著降低ＴＧＦ－Ｍ＾表達，降低ＥＣＭ生成，??有效的減緩疾病的進展，改善腎臟疾病的諸多癥狀如蛋白尿、炎癥細胞浸潤和??纖維化［４３４５］（如圖１）。因此，我們可以認為，如果能夠抑制Ａｎｇｌｌ的表達，則可??能抑制細胞分泌ＥＣＭ。??Ａｎｇ?ＩＩ??￣￥?＿＿ＴＧＦ－Ｐ??Ｘ?￣￣１?￣￣??／?Ｒｅｎａｌ?ｃｅｌｌｓ?＼?藝．??／?（ｍｅｓａｎｇｉａｌ，?ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ??丨廣－產(chǎn)??ＥＣＭ?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ??圖１?Ａｎｇ?ＩＩ誘導ＥＣＭ堆積的機制??Ｆｉｇ．ｌ?ｔｈｅ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ＥＣＭ?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ?Ａｎｇ?ＩＩ?－ｉｎｄｕｃｅｄ??腎素（原）受體［（ｐｒｏ）ｒｅｎｉｎ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＰＲＲ］在調(diào)控Ａｎｇｌｌ的生成中起著重要作用??Ｋ６４８］。２００２年，首次報道了?ＲＡＳ上游的一個新成員一ＰＲＲ，主要位于細胞表面??以及細胞間隔，尤其是核周間隙［４９，?５Ｑ］。ＰＲＲ參與Ａｎｇｌｌ的生成主要通過兩個途??徑：蛋白水解途徑和非蛋白水解途徑［５１，５２］。蛋白水解途徑，具體來說，是腎素??原與ＰＲＲ結(jié)合，產(chǎn)生的一系列移除腎素原前肽的級聯(lián)效應(yīng)。腎素原是腎素的前??５??

（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ?Ｉ，ＡｎｇＩ），血管經(jīng)張素原向Ａｎｇｌ、ＩＩ轉(zhuǎn)化。非蛋白水解途徑，即??腎素原與ＰＲＲ結(jié)合后，通過構(gòu)型改變，暴露出其活性部位，并與ＡＧＴ發(fā)生結(jié)合，??產(chǎn)生生成Ａｎｇｌｌ的ＲＡＳ級聯(lián)（如圖２）。通過蛋白酶解生成的腎素，又與ＰＲＲ??結(jié)合，可增加其５倍的酶促活性［４９］。有研究發(fā)現(xiàn)，ＤＭ患者腎臟中ＰＲＲ表達上??調(diào)。阻斷ＰＲＲ可以改善ＤＮ腎部分切除術(shù)大鼠的蛋白尿和腎小球硬化。因此，??可以認為，在ＤＮ的發(fā)生發(fā)展過程中，ＰＲＲ發(fā)揮著重要的細胞生物學效應(yīng)。??ｆ?＾ａｃ＾＊ｅ?ｐｒｏｒｅｎｉｎ??ｐｒｏｔｅｏｈｌｉｃ?／?＼?ｎｏｎ－ｐｒｏｔｅｏＭｃ??ｒ?．?／?＼?離?ａｃｔｉｖｅ?ｓ�。簦�??／?＼?，一，?ｐｒｏｓｅｇｍｅａｔ??ｒｅｎｉｎ??圖２腎素原的蛋白水解和非蛋白水解途徑??Ｆｉｇ．２?ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ?ａｎｄ?ｎｏｎ－ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｐｒｏｒｅｎｉｎ??綜上，我們可以認為，ＤＮ發(fā)展為ＥＳＲＤ的過程中，腎臟纖維化是一個重要??且無法回避的病理過程。ＥＣＭ在腎臟中的過度堆積，是造成腎臟纖維化的重要??原因。在調(diào)控ＥＣＭ生成的上游因子中，ＴＧＦ－（３表現(xiàn)出了關(guān)鍵作用。在調(diào)節(jié)ＴＧＦ－Ｐ??的上游因素中

在調(diào)控ＥＣＭ生成的上游因子中，ＴＧＦ－（３表現(xiàn)出了關(guān)鍵作用。在調(diào)節(jié)ＴＧＦ－Ｐ??的上游因素中，Ａｎｇｌｌ具有重要的意義。ＰＲＲ在Ａｎｇｌｌ的級聯(lián)中扮演者不可或缺??的角色（如圖３）。??６??
【參考文獻】

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本文編號：2892591