【摘要】：目的:胃腸積熱是無形熱邪或有形熱結(jié)壅于胃腸,而致胃腸氣分熱盛的證態(tài),其形成的主要原因是飲食積滯,蘊而化熱。胃腸積熱常見于小兒,與小兒肺炎的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。小兒肺炎患者也多有胃腸積熱表現(xiàn),故臨床應(yīng)予以肺胃同治法治療。銀萊湯以肺胃同治法組方,由金銀花、連翹、黃芩、魚腥草、前胡、萊菔子和全瓜蔞組成,全方在上可清宣太陰肺經(jīng)之熱邪,在下可清泄陽明胃腸之積滯,共奏肺胃同治之效,臨床用于治療小兒肺炎兼有胃腸積熱者,療效顯著。小兒肺炎是由不同病原體或其他因素所致的肺部炎癥,是兒童呼吸系統(tǒng)常見疾病。引起小兒肺炎的病原體主要有細菌、病毒、支原體、衣原體等,但各種病原體所致的肺炎均以發(fā)熱、咳嗽、氣促、肺部固定濕Up音等為典型表現(xiàn),可參考中醫(yī)的小兒肺炎喘嗽辨證治療。脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)是革蘭陰性菌內(nèi)毒素的主要成分,可介導(dǎo)機體的炎癥反應(yīng),且因其毒性較弱,各菌間LPS產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)類似,無明顯特異性,可用于非特異性肺炎模型的制備。前期研究運用病因?qū)W造模方法,成功復(fù)制了以高熱量高蛋白飲食為特點的胃腸積熱小鼠模型,并在此基礎(chǔ)上研究胃腸積熱對肺炎小鼠的影響,以及銀萊湯的干預(yù)作用,發(fā)現(xiàn)胃腸積熱可導(dǎo)致肺炎小鼠肺指數(shù)增加,肺損傷加重,而銀萊湯可明顯減輕胃腸積熱復(fù)合肺炎模型小鼠的肺損傷情況。之后分別從炎癥、免疫和腸黏膜屏障等方面對胃腸積熱的致病機制和銀萊湯的作用機制進行了探討。但相關(guān)研究仍缺乏系統(tǒng)性的評價,其有關(guān)機制仍有待進一步明確。本課題在前期研究基礎(chǔ)上,擬運用同位素標記相對和絕對定量(iTRAQ)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),觀察肺炎模型小鼠和胃腸積熱復(fù)合肺炎模型小鼠肺組織蛋白質(zhì)組學(xué)特征,并在此基礎(chǔ)上進一步比較分析胃腸積熱對肺炎小鼠肺組織蛋白表達的影響,以及銀萊湯對胃腸積熱復(fù)合肺炎小鼠肺組織蛋白表達的影響,以期從肺組織蛋白質(zhì)組學(xué)層面部分闡明胃腸積熱影響小兒肺炎發(fā)生發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ),以及銀萊湯治療胃腸積熱復(fù)合肺炎的作用機制,從而為小兒肺炎的預(yù)防和治療提供一定的實驗依據(jù)。方法:通過LPS霧化吸入誘導(dǎo)小鼠肺炎模型(M1組),通過高熱量高蛋白飲食復(fù)合LPS霧化吸入誘導(dǎo)小鼠胃腸積熱復(fù)合肺炎模型(M2組),以銀萊湯為胃腸積熱復(fù)合肺炎模型的干預(yù)藥物(Y組),觀察三組小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、肺指數(shù)和肺組織病理變化情況,之后運用iTRAQ標記蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),觀察各組小鼠肺組織蛋白表達情況,并進一步分析各組間蛋白差異表達情況。結(jié)果:1.肺指數(shù)、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的變化與正常組比較,M1組和M2組的肺指數(shù)明顯升高(p0.05);與M1組比較,M2組肺指數(shù)明顯升高(p0.05);與M2組比較,Y組肺指數(shù)降低,但差異不明顯(p=0.458)。與正常組比較,M2組脾指數(shù)明顯升高(p0.05),M1組脾指數(shù)升高,但差異不明顯(p=0.39)。與M1組相比,M2組脾指數(shù)升高,但差異不明顯(p=0.204)。與M2組比較,Y組脾指數(shù)明顯升高(p0.05)。與正常組比較,M1組和M2組胸腺指數(shù)降低,但差異不明顯(p0.05)。與M1組比較,M2組胸腺指數(shù)降低,但差異不明顯(p0.05)。與M2組比較,Y組胸腺指數(shù)升高,但差異不明顯(p0.05)2.肺組織病理變化M1組小鼠肺組織出現(xiàn)肺泡結(jié)構(gòu)破壞,肺間隔增寬,存在肺泡融合并伴有炎性細胞浸潤。M2組小鼠肺組織病變程度較M1組重,有明顯肺實變,有大量炎癥細胞浸潤。Y組小鼠肺組織病變程度較M2組減輕,肺間隔增厚減少,周圍間質(zhì)內(nèi)炎性浸潤減少。3.肺組織蛋白表達情況本次實驗共鑒定出2626個可信蛋白(peptides≥1,且在三次實驗中可重復(fù)出現(xiàn))。以p0.05,差異變化倍數(shù)(Fold Change, FC)大于1.5為標準篩選各組間差異蛋白。與正常組相比,M1組小鼠肺組織中有344種差異表達蛋白,其中224種表達上調(diào),120種表達下調(diào);其涉及有顯著變化(p0.05)的生物學(xué)過程有1287個,細胞組分有197個,分子功能有234個,KEGG通路有26個。其中生物學(xué)過程主要有機體對有機物的反應(yīng)、細胞因子響應(yīng)、細胞對化學(xué)刺激的反應(yīng)、機體對化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)、細胞對細胞因子刺激的反應(yīng)、機體對外部刺激的反應(yīng)、防御反應(yīng)和免疫系統(tǒng)進程等;相關(guān)的信號通路主要有細胞外基質(zhì)相互作用、白細胞遷移、FcγR介導(dǎo)的吞噬作用、補體系統(tǒng)、抗原提呈和加工、核糖體、氨基酰轉(zhuǎn)運RNA合成、蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的加工、氨基酸合成、碳代謝、糖酵解/糖異生和磷酸戊糖途徑等。與正常組相比,M2組小鼠肺組織中有521種差異表達蛋白,其中273種表達上調(diào),248種表達下調(diào);其涉及有顯著變化(p0.05)的生物學(xué)過程有1158個,細胞組分有242個,分子功能有234個,KEGG通路有39個。其中生物學(xué)過程主要有生物附著、細胞粘附、機體對有機物的反應(yīng)、機體對化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)、免疫系統(tǒng)進程、防御反應(yīng)、細胞因子響應(yīng)、有機氮化合物代謝過程、肽代謝過程、氣體運輸、小分子代謝和氧化還原反應(yīng)等;而相關(guān)的信號通路主要有細胞外基質(zhì)相互作用、黏著斑、細菌入侵上皮細胞、白細胞遷移、吞噬體、核糖體、碳代謝和三羧酸循環(huán)等。與M1組比較,M2組小鼠肺組織中有164種差異表達蛋白,其中14種表達上調(diào),150種表達下調(diào),其涉及有顯著變化(p0.05)的生物學(xué)過程有588個,細胞組分有131個,分子功能有144個,KEGG通路有20個。其中生物學(xué)過程主要有小分子代謝過程、氣體運輸、嘌呤核糖核苷酸代謝過程、核糖核苷酸代謝過程、磷酸核糖代謝、細胞粘附和生物附著等。而相關(guān)信號通路主要有氧化磷酸化、三羧酸循環(huán)、丁酸甲酯代謝、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解、核糖體、細胞外基質(zhì)相互作用、黏著斑、補體系統(tǒng)和血管平滑肌收縮等。與M2組比較,Y組肺組織中有87種差異表達蛋白,其中73種表達上調(diào),14種表達下調(diào),其涉及有顯著變化(p0.05)的生物功能有403個,細胞組分有112個,分子功能有114個,KEGG通路有21個。其中生物過程主要有檸檬酸代謝過程、細胞呼吸、三羧酸代謝過程、三羧酸循環(huán)、有機化合物氧化供能以及前體代謝物和能量的產(chǎn)生等。而相關(guān)的信號通路主要有三羧酸循環(huán)、氧化磷酸化、脂肪酸代謝、色氨酸代謝、賴氨酸降解、纈氨酸亮氨酸異亮氨酸降解和核糖體等。結(jié)論:1.胃腸積熱能夠加重LPS所誘導(dǎo)的肺炎模型小鼠肺部炎癥損傷,而銀萊湯能夠減輕胃腸積熱復(fù)合肺炎模型小鼠的肺部炎癥損傷。2.LPS霧化吸入不僅能夠引起肺組織炎癥,還可以影響蛋白質(zhì)的合成和碳水化合物的代謝。3.胃腸積熱可能通過影響小鼠的物質(zhì)能量代謝,進一步影響其免疫功能,進而加重LPS所致的炎癥損傷。4.銀萊湯可能通過調(diào)節(jié)胃腸積熱復(fù)合肺炎小鼠的物質(zhì)能量代謝,達到其治療作用。5.三羧酸循環(huán)功能的改變可能是胃腸積熱致病作用和銀萊湯治療作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。
【圖文】：
基十蛋ｄ質(zhì)組學(xué)對胃腸積熱復(fù)合肺炎小鼠生物學(xué)特征及銀萊湯干預(yù)作用的研宄逡逑表１．１各組小鼠肺指數(shù)、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)（ｘ土ｓ）逡逑Ｄ邐Ｍｌ邐Ｍ２逡逑肺指數(shù)邐７．２８７邋＋邋０．４５１邐９．７４２邋±０．７４４＊￣１０．８９１＋０．９７８＊＃￣￣逡逑脾指數(shù)邐３．６３６±０．３８２邐３．８４５邋±０．４３５邋４．１５７邋＋邋０．６６０＊逡逑胸腺指數(shù)邐４．７０２邋＋邋０．８６３邐４．５９９邋＋邋０．５８４邋４．４７０邋＋邋０．６９８逡逑注：＊與Ｄ組比較，Ｐ＜０．０５；邋＃與Ｍｌ組比較，，ｐ＜０．０５。逡逑－邐邐邐逡逑
圖ｉ．ｉ各組小鼠肺指數(shù)、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)柱狀圖逡逑１．３肺＿病理改變逡逑肺組織病理顯示（圖１．３），正常組小鼠肺組織肺泡結(jié)構(gòu)一致，肺泡壁薄，肺泡腔及逡逑管腔內(nèi)無炎性浸潤，細支氣管結(jié)構(gòu)完整清晰，單層柱狀或立方上皮細胞排列緊密，上皮逡逑外平滑肌呈完整環(huán)形。胃腸積熱合并肺炎組和肺炎組小鼠肺組織均出現(xiàn)肺泡結(jié)構(gòu)破壞不逡逑清，肺間隔顯著增寬，存在肺泡融合甚至消失，血管擴張充血，并伴有大量炎性細胞浸逡逑潤。單層柱狀上皮細胞排列紊亂，細胞脫落明顯，管腔及其周圍肺間質(zhì)內(nèi)存在大量炎性逡逑細胞浸潤。肺炎組小鼠肺組織病變程度較胃腸積熱合并肺炎組輕，肺泡邊界相對清楚，逡逑肺泡壁較薄，肺間隔增厚，伴血管充血，肺泡腔及管腔內(nèi)少量炎性細胞漫潤，周圍間質(zhì)逡逑內(nèi)炎性浸潤較少，單層柱狀上皮細胞排列相對整齊緊密。逡逑４７逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【參考文獻】
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本文編號：
2594031
