發(fā)布時間：2020-03-22 01:33

【摘要】：目的:本研究通過建立腹主動脈縮窄左室心肌肥厚大鼠模型及Ang II誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞肥大模型,從在體與離體水平觀察阿魏酸鈉(Sodium Ferulate,SF)抗心肌肥大效應(yīng)及其可能的作用機(jī)制。方法:采用腹主動脈縮窄(abdominal aortic constriction,AAC)法制備大鼠左室肥厚模型。實驗動物隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組和SF低(20 mg/kg/d)、中(40mg/kg/d)、高(80mg/kg/d)組。連續(xù)給藥25天后檢測大鼠血流動力學(xué)指標(biāo),計算左心室重量指數(shù),病理學(xué)方法觀察大鼠心肌病理形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)改變,放射免疫法測定大鼠心肌組織中血管緊張素II(AngII)及內(nèi)皮素-1(ET-1)含量,實時熒光定量PCR(Real time PCR)法檢測心房利鈉因子(atrial natriuretic factor,ANF)、β-肌球蛋白重鏈(β-myosin heavy chain,β-MHC)、PKC-β、Raf-1、ERK1/2及MKP-1 mRNA表達(dá);蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blotting)檢測PKC-β、Raf-1、p-ERK1/2及MKP-1蛋白質(zhì)表達(dá)。采用0.1μmol·L-1血管緊張素II(AngII)誘導(dǎo)離體培養(yǎng)的大鼠乳鼠心肌細(xì)胞肥大模型。采用MTT法檢測細(xì)胞活性,明確給藥劑量;實驗隨機(jī)分為9組:正常組、正常給藥組、模型組、SF低(50μmol·L-1)、中(100μmol·L-1)、高(200μmol·L-1)組;為觀察SF抗心肌細(xì)胞肥大的作用是否與NO釋放有關(guān),同時設(shè)置了NO的前體物質(zhì)L-精氨酸(L-arg)組、L-arg+NO合酶抑制劑NG-硝基-L-精氨酸-甲酯(L-NAME)組及SF-H+L-NAME組。以心肌細(xì)胞直徑、細(xì)胞蛋白質(zhì)含量、ANF和β-MHC m RNA表達(dá)為心肌肥大的標(biāo)志,HE染色觀察細(xì)胞肥大情況;通過試劑盒檢測細(xì)胞上清液中NO水平、NOS與eNOS活性、cGMP及cAMP含量、eNOS、PKC-β、Raf-1、ERK1/2及MKP-1 mRNA及蛋白表達(dá),進(jìn)一步明確SF抗心肌肥大的作用機(jī)制。結(jié)果:(1)經(jīng)制模各組大鼠血壓(BP)和左室內(nèi)壓(LVSP)明顯高于假手術(shù)組,與假手術(shù)組比較,模型組大鼠左心室肥厚指數(shù)LVHI和MD均明顯升高,心肌組織形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)受損明顯,反映心臟舒縮活動的指標(biāo)LVEDP及±dp/dtmax明顯異常,心肌肥大標(biāo)志性基因ANF及β-MHC mRNA表達(dá)顯著上調(diào)。與模型組比較,SF給藥組使LVHI和MD趨于下降或明顯降低,左室心肌形態(tài)學(xué)、超微結(jié)構(gòu)及左室舒縮功能不同程度改善,ANF及β-MHC mRNA表達(dá)也呈趨于下調(diào)或顯著下調(diào)。(2)模型組大鼠心肌組織中AngII和ET-1含量顯著升高,同時PKC-β、Raf-1和ERK1/2 mRNA及蛋白表達(dá)明顯上調(diào),而MKP-1 mRNA及蛋白表達(dá)顯著下調(diào)。而SF給藥組可不同程度降低心肌組織中AngII和ET-1的含量,同時下調(diào)PKC-β、Raf-1和ERK1/2 mRNA及蛋白表達(dá),上調(diào)MKP-1 mRNA及蛋白的表達(dá)。(3)SF(50,100,200μmol·L-1)對離體培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞無明顯毒副作用。且0.1μmol·L-1 Ang II能夠顯著誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大,使心肌細(xì)胞直徑及蛋白含量增加,ANF和β-MHC m RNA表達(dá)上調(diào)。SF給藥各組及陽性藥L-精氨酸(L-arg,1000μmol·L-1)組可不同程度改善心肌細(xì)胞肥大的各項效應(yīng)指標(biāo),且其抑制心肌細(xì)胞肥大的效應(yīng)可被L-NAME取消。(4)與正常組比較,0.1μmol·L-1 Ang II可誘導(dǎo)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞上清液NO含量、NOS及eNOS活性降低、心肌細(xì)胞中cGMP含量降低,cAMP含量升高,同時存在心肌細(xì)胞PKC-β、Raf-1、ERK1/2表達(dá)上調(diào),MKP-1及eNOS表達(dá)下調(diào)。而SF高劑量及L-arg給藥組可明顯升高NO含量、NOS及eNOS活性、心細(xì)胞肌中cGMP含量,降低cAMP含量,下調(diào)PKC-β、Raf-1、ERK1/2表達(dá)而上調(diào)MKP-1及eNOS表達(dá)。結(jié)論:SF可抑制AAC術(shù)所致的大鼠左心室肥厚及Ang II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大。其作用機(jī)制可通過促進(jìn)NO-cGMP信號途徑,抑制PKC及MAPK信號通路至少部分相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2594248