發(fā)布時間：2020-03-21 00:05

【摘要】：目的 探討丹參通絡(luò)解毒湯聯(lián)合內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)移植對心肌缺血再灌注損傷(IRI)模型大鼠的促血管新生作用及其機(jī)制。方法 采用密度梯度離心法及差數(shù)貼壁法分離和培養(yǎng)EPCs,采用免疫熒光法鑒定EPCs。通過結(jié)扎左冠狀動脈左前降支的方法建立IRI模型,采用隨機(jī)數(shù)字表法分為SH組(假手術(shù)組)、IRI組(模型組)、EPCs組(EPCs移植組)、DSTLJD組(丹參通絡(luò)解毒湯組)、DSTLJD+EPCs組(丹參通絡(luò)解毒湯+ EPCs移植組)、PI3K抑制劑組(丹參通絡(luò)解毒湯+EPCs 移植+PI3K 抑制劑 LY294002),每組 10只。EPCs 組、DSTLJD+EPCs組、PI3K抑制劑組大鼠術(shù)后于尾靜脈處注入EPCs懸液,DSTLJD組、DSTLJD+EPCs組、PI3K抑制劑組于術(shù)后1天予丹參通絡(luò)解毒湯灌胃,每天2次,其余組予生理鹽水灌胃,PI3K抑制劑組在術(shù)后經(jīng)尾靜脈注射LY294002(PI3K的特異性抑制劑LY294002,0.3 mg/kg)。4周后,采用HE染色法觀察心肌組織的病理形態(tài);用免疫組化法測定各組大鼠心肌組織CD34的表達(dá),比較和計算心肌微血管計數(shù)(MVC)、心肌微血管密度(MVD),并檢測各組大鼠血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維生長因子(bFGF)的蛋白表達(dá);采用Western blot檢測各組大鼠PI3K、p-AKT、AKT的蛋白表達(dá)。結(jié)果 與IRI組比較,EPCs組、DSTLJD組、DSTLJD+EPCs組大鼠心肌組織損傷程度較前改善,MVC、MVD顯著增多,VEGF、bFGF蛋白表達(dá)均顯著增高,PI3K、p-AKT表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),其中DSTLJD組優(yōu)于EPCs組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與EPCs組、DSTLJD組相比,DSTLJD+ EPCs組心肌損傷程度較前明顯改善,MVC、MVD明顯增多,VEGF、bFGF蛋白表達(dá)明顯增高,PI3K、p-AKT表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與DSTLJD+EPCs組比較,在丹參通絡(luò)解毒湯聯(lián)合EPCs移植的基礎(chǔ)上,應(yīng)用PI3K抑制劑LY294002之后,PI3K抑制劑組大鼠心肌組織損傷程度較重,MVC、MVD明顯降低,VEGF、bFGF蛋白表達(dá)明顯下降,PI3K的表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),p-AKT的表達(dá)顯著下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:1.丹參通絡(luò)解毒湯可明顯減少炎性細(xì)胞的浸潤,改善心肌組織病理形態(tài)。2.丹參通絡(luò)解毒湯可明顯使MVC、MVD增多,上調(diào)VEGF、bFGF的表達(dá),升高PI3K、p-AKT的表達(dá),促進(jìn)心肌IRI大鼠的血管新生,其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號通路有關(guān)。3.丹參通絡(luò)解毒湯聯(lián)合EPCs移植可明顯改善心肌組織病理形態(tài),使MVC、MVD顯著增多,明顯上調(diào)VEGF、bFGF的表達(dá),顯著升高PI3K、p-AKT的表達(dá),促進(jìn)血管新生,從而保護(hù)IRI大鼠心肌,且作用優(yōu)于單純丹參通絡(luò)解毒湯與單純EPCs移植,且其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號通路有關(guān)。
【圖文】：

第1d分離的單核細(xì)胞（10*）

7d后EPCs呈梭形改變（10*）
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2592410