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氡影響皮膚組織蛋白質-miRNA調控網絡的機制研究

發(fā)布時間:2020-11-15 06:12
   目的:流行病學研究表明:氡與皮膚癌等皮膚相關疾病的發(fā)生具有相關性。但氡對于皮膚組織影響及機理尚未見報道。本研究旨在研究氡對于皮膚組織和細胞的影響及分子網絡變化。方法:通過建立染氡小鼠及皮膚成纖維細胞(WS1)模型,探究染氡對于皮膚組織及WS1細胞的影響,篩選皮膚組織差異蛋白和mi RNA,并通過體外實驗研究差異蛋白對皮膚細胞WS1生物學功能影響。(1)利用多功能生態(tài)氡室和多功能生態(tài)細胞氣體染毒裝置建立氡染毒小鼠(BALB/c和C57小鼠)模型和細胞染氡模型。通過對不同染氡劑量小鼠皮膚組織的HE染色、β-半乳糖苷酶染色、Masson染色,觀察小鼠皮膚組織損傷變化。通過對染氡細胞WS1的形態(tài)學觀察、MTT檢測、凋亡檢測、細胞周期檢測和細胞核染色,觀察皮膚細胞染氡后的變化;(2)收集染氡小鼠模型的皮膚組織蛋白,通過同位素標記相對和絕對定量(i TRAQ)技術和HPLC/MS技術,對對照組/染氡皮膚組織進行分析。通過數據庫搜索,對差異蛋白進行生物信息學分析;(3)采用mi RNA芯片篩選對照組/染氡皮膚組織中差異表達的mi RNA。(4)研究mi RNA對脂肪酸合成酶(FASN)的表達調控;(5)研究表達FASN對皮膚細胞生物功能的影響。結果:(1)染氡能夠引起小鼠皮膚組織的損傷,包括角質層變薄和缺損、皮膚組織的衰老以及皮膚組織內線粒體的腫脹形態(tài)變化;(2)染氡能夠抑制皮膚細胞WS1的增殖,增加細胞凋亡率,使細胞核形態(tài)發(fā)生變化,產生固縮和破碎;(3)通過蛋白組學,篩選出了3496個差異蛋白,其中上調超過1.8倍的45個,下調低于0.83的83個。篩選可能參與染氡對小鼠皮膚組織影響的上調蛋白:脂肪酸合成酶FASN;(4)通過mi RNA分析和靶基因預測,篩選出了57個差異mi RNA和5907個下游靶基因。通過Target Scan數據庫篩選出下調mi R206-3p和mi R378a-3p;(5)通過生物信息學分析建立了染氡后差異蛋白質和mi RNA的相互作用網絡。差異表達的mi R206-3p和mi R378a-3p能調控脂肪酸合成酶(FASN)的表達。過表達FASN對皮膚細胞WS1增殖產生了抑制,引起了細胞周期S期的阻滯,同時還增加了細胞凋亡率和破壞了細胞核形態(tài)。結論:氡能夠引起皮膚組織和細胞的變化甚至損傷,影響其生物學功能;氡能引起的皮膚組織一系列的蛋白質和mi RNA差異變化;差異表達的mi R206-3p和mi R378a-3p能調控FASN的表達;過表達差異蛋白FASN能夠影響皮膚細胞增殖,增加凋亡等。
【學位單位】:蘇州大學
【學位級別】:碩士
【學位年份】:2018
【中圖分類】:R818
【部分圖文】:

細胞模型,小鼠,并用,方法


miRNA加工過程

細胞,氡濃度,培養(yǎng)皿,氧氣


將 transwell 培養(yǎng)皿置于細胞氣體染毒裝置染毒,見圖 2。對細胞直接染毒,膜下方通過培養(yǎng)基保持細胞濕潤。氧氣濃mL/min,染毒時間為 30min,暴露氡濃度為 20000Bq/m3。1 代(記作 HR-1)。收集細胞常規(guī)培養(yǎng),進行下一代染毒。

HE染色,變現,附屬結構,毛囊


同劑量的氡染毒后,小鼠皮膚組織真皮組織及毛囊等皮膚附屬結構依然清晰。但隨著染氡劑量的增加,皮膚組織表皮逐漸變現了明顯的腫脹,在 120WLM 的 BALB/c 小鼠皮膚組中,甚至失(圖 1.1.1 箭頭所示)。同樣的角質層變薄的現象也出現在了
【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 苗超,仲恒高,孫靜,聶繼華,蘇世標,童建;氡及其子體對小鼠血液和骨髓細胞的影響[J];中國血液流變學雜志;2005年02期

2 李冰燕,童建;氡及其子體對大鼠靶器官損傷的研究[J];衛(wèi)生毒理學雜志;2004年03期

3 李冰燕,童建;氡及其子體對大鼠免疫器官的影響[J];中華放射醫(yī)學與防護雜志;2004年03期

4 ;Mitochondrial microsatellite instability in gastric cancer and its precancerous lesions[J];World Journal of Gastroenterology;2004年06期



本文編號:2884438

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